TTX心脏停搏液对离体鼠心缺血再灌注心肌闰盘蛋白的影响

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目的:研究Na+通道阻滞剂河豚毒素(TTX)心脏停搏液对离体鼠心缺血再灌注心肌闰盘蛋白的影响。方法:20只Wistar大鼠随机均分入TTX组(实验组)和STH-2组(对照组)。建立离体心脏Langendorff和Neely灌注模型;待搏动稳定后持续灌注30 min,两组分别用TTX和St.Thomas-2心脏停搏液停搏并4℃保存60 min;然后恢复灌注60 min,取左心室肌备检。采用免疫组化(IH)和蛋白质印迹(WB)检测缺血再灌注后心肌闰盘蛋白的分布情况及表达量的变化,包括桥粒相关蛋白(Dsp和结蛋白)、缝隙连接相关蛋白(Cx43)、粘合连接相关蛋白(N型钙粘着糖蛋白和α肌动蛋白)等。同时通过观察心脏的停搏和复搏速率,各组心脏停搏前后的血流动力学参数心率(HR)、冠状动脉流量(CAF)、左心室收缩末期压(LVESP)、左心室最大压力变化速率(±dp/dt)等,了解心功能的变化。结果:桥粒相关蛋白的IH检测显示TTX组的Dsp和结蛋白较STH-2组分布整齐规则;Dsp和结蛋白表达量分别为0.0547±0.0057和0.0513±0.0003 ,明显高于STH-2组的0.0451±0.0084和0.0343±0.0003(P<0.01)。WB检测显示TTX组的Dsp和结蛋白表达量分别为1.1773±0.0075和1.1422±0.0362,明显高于STH-2组的0.7997±0.0080和0.7648±0.0215(P<0.01)。缝隙连接相关蛋白的IH检测显示TTX组的Cx43分布情况较STH-2组规则;TTX组的Cx43表达量为0.0229±0.0014,明显高于STH-2组的0.0166±0.0008(P<0.01)。WB检测显示TTX组的Cx43表达量为0.9829±0.0079,明显高于STH-2组的0.5047±0.0067(P<0.01)。粘合连接相关蛋白的IH检测显示与STH-2组比较,TTX组的N型钙粘着糖蛋白和α肌动蛋白分布较规则整齐;TTX组的N型钙粘着糖蛋白和α肌动蛋白表达量分别为0.0677±0.0003和0.0738±0.0005,明显高于STH-2组的0.0243±0.0003和0.0305±0.0002(P<0.01)。WB检测显示TTX组的α肌动蛋白表达量为1.0178±0.0158,明显高于STH-2组的0.3828±0.0137(P<0.01)。与STH-2组比较,TTX组的停搏和复搏速率均明显缩短(P<0.05);缺血前,两组的血流动力学参数无差异;再灌注期间,TTX组的血流动力学参数的恢复率优于STH-2组(P<0.05)。结论:与STH-2心脏停搏液比较,在TTX心脏停搏液停搏离体大鼠心脏条件下,心肌闰盘蛋白(Dsp、结蛋白、Cx43、N型钙粘着糖蛋白、α肌动蛋白)的表达量明显增多,表明TTX心脏停搏液能够减轻缺血再灌注对离体鼠心心肌闰盘蛋白的损伤,能更好地保护心肌闰盘结构,同时心功能恢复更好。提示TTX心脏停搏液对离体大鼠心肌缺血-再灌注损伤有更好的保护作用。
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