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草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus，GCRV)为双链分段RNA病毒，无胞膜双层衣壳，隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属。草鱼呼肠孤病毒是我国分离的第一株鱼类病毒，该病毒曾一度引起我国淡水养殖地区大规模暴发流行性草鱼出血病，给水产养殖业造成了严重的危害。目前，全世界已经分离出60余种水生呼肠孤病毒，而草鱼呼肠孤病毒被认为是致病力最强的毒株，迄今在我国南方及长江流域淡水养殖基地仍时有草鱼出血病发生，并有再度暴发的隐患。为探讨GCRV的致病机理及寻找有效的防治途径，本研究进行了GCRV外衣壳蛋白VP5和VP7的体外表达与免疫原性分析，并建立了RT-PCR快速检测GCRV核酸的方法。该实验结果为进一步揭示草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞的相互作用关系与侵染机制以及基因工程疫苗与病毒核酸快速检测试剂盒的开发应用奠定了良好的基础。本研究论文分为三章：
第一章：文献综述。本章通过对呼肠孤病毒一般生物学特性的了解，着重介绍了dsRNA病毒基因组与进化、结构与功能研究及同类病毒国内外研究的现状与进展及本课题的研究目的及意义。
第二章：GCRV外衣壳蛋白的表达和抗原性分析。为了获得体外表达的GCRV外衣壳蛋白VP5和VP7，采用特异性的引物通过RT-PCR扩增，分别得到两条特异的、大小与理论值相符的编码GCRV外衣壳蛋白的基因s6(2.0kb)和s10(0.9kb)。将其扩增片段分别克隆于含有T7启动子的高效原核表达系统pRSET载体，由此成功构建重组GCRV外衣壳蛋白pR/GCRV-VP5和pR/GCRV-VP7的克隆与表达菌株。重组表达菌株经IPTG诱导以后，获得分子量分别为70KDa(VP5)和37KDa(VP7)的融合目的蛋白。高效表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在。Western blot分析表明，表达蛋白与兔抗GCRV抗体呈阳性反应。此外，我们用纯化的蛋白免疫小兔获得了抗血清，ELISA实验证实表达的蛋白具有较高的免疫原性。中和实验结果显示体外表达的VP7蛋白的抗血清中和病毒能力较VP5高，提示VP7单一蛋白较VP5有较强的免疫原性。而外衣壳蛋白VP5和VP7抗体同时作用时，其中和GCRV抗原的能力较单一抗体强。该结果为进一步研究GCRV外衣壳蛋白进入细胞的机制以及在感染过程中与病毒蛋白和宿主细胞的相互作用奠定了基础。
第三章：草鱼呼肠孤病毒核酸RT-PCR快速检测方法的建立。为建立一种特异、灵敏、快速检测GCRV核酸的方法，本研究采用一步法提取细胞与组织总RNA，通过逆转录酶链式反应(RT-PCR)从病毒感染的细胞与组织中扩增出草鱼呼肠孤病毒的基因片段。实验结果显示，该检测方法简便可靠，特异性强，其最低检测灵敏度为10-6ng，所需时间仅为4.5 h。该结果将有望应用于GCRV临床快速诊断及鱼苗的进出口海关检疫，同时在同类病毒与相关食品安全商品化检测试剂盒的开发与推广中具有很大的实用价值。