【摘 要】
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目的探讨《金匱要略》“见肝之病,知肝传脾,当先实脾”中“见肝之病,知肝传脾”的生物学依据;探讨疏肝、健脾、疏肝健脾、先疏肝再疏肝健脾、先健脾再疏肝健脾不同治疗方法对肝损伤大鼠肝肠功能影响的作用机制。方法1.探讨“见肝之病,知肝传脾”生物学依据,采用随机数字表法将48只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、双环醇组、四逆散组（疏肝）、六君子汤组（健脾）、柴甲组（疏肝健脾）、柴乙组（先疏肝,再疏肝健脾）、柴
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目的探讨《金匱要略》“见肝之病,知肝传脾,当先实脾”中“见肝之病,知肝传脾”的生物学依据;探讨疏肝、健脾、疏肝健脾、先疏肝再疏肝健脾、先健脾再疏肝健脾不同治疗方法对肝损伤大鼠肝肠功能影响的作用机制。方法1.探讨“见肝之病,知肝传脾”生物学依据,采用随机数字表法将48只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、双环醇组、四逆散组（疏肝）、六君子汤组（健脾）、柴甲组（疏肝健脾）、柴乙组（先疏肝,再疏肝健脾）、柴丙组（先健脾,再疏肝健脾）,每组6只。除正常组外,其余各组大鼠采用束缚叠加皮下注射四氯化碳（CC14）橄榄油溶液方法建立肝郁叠加肝损伤病证结合动物模型,双环醇组、四逆散组、六君子汤组、柴甲组大鼠分别给予双环醇、四逆散、六君子汤、柴芍六君子汤灌胃42天;柴乙组先用四逆散灌胃21天后用柴芍六君子汤灌胃21天;柴丙组先用六君子汤灌胃21天后用柴芍六君子汤灌胃21天;正常组与模型组给予去离子水灌胃。Haematoxylin-eosin staining（HE）染色观察肝脏及结肠组织结构;利用电镜进一步观测肝脏、结肠微观结构;利用全自动生化分析仪检测血清肝功能生化指标:碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）;RT-PCR法检测大鼠肝脏及结肠中G蛋白偶联胆汁酸受体（TGR5）mRNA相对表达量;利用免疫组化方法检测大鼠肝脏、结肠TGR5阳性表达率。2.探讨疏肝、健脾、疏肝健脾、先疏肝再疏肝健脾、先健脾再疏肝健脾不同治疗方法对肝损伤大鼠肝肠功能影响的作用机制。采用上述方法制备模型及给药后,利用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜闭锁小带-1（Zo-1）、封闭蛋白（Occludin）、密蛋白-1（Claudin-1）mRNA相对表达量;利用免疫组化方法检测大鼠结肠增殖细胞核抗原PCNA阳性表达率;AB-PAS染色观察大鼠结肠杯状细胞数量。结果1.模型组大鼠实验指标检测结果,HE染色结果显示:肝小叶结构不清,肝脂肪变性并伴炎性细胞浸润;结肠固有层和腺管有炎性细胞浸润。电镜观察结果示:肝细胞线粒体肿胀,基质颗粒减少,脊缩短,粗面内质网呈明显脱颗粒现象,糖原减少,脂肪空泡增多;结肠微绒毛排列紊乱,有脱落现象。血清肝生化指标显示:大鼠血清ALP、ALT、AST、TBIL、DBIL水平明显升高,表明大鼠肝功能受损。大鼠TGR5肝脏表达降低、结肠表达升高且结肠紧密连接蛋白Zo-1、Occludin、Claudin-1及PCNA、杯状细胞数量表达显著下降。2.血清肝生化指标结果显示:与模型组比较,双环醇、六君子汤、柴甲、柴乙、柴丙组 ALP、ALT、AST、TBIL、DBIL 水平降低,四逆散组 ALP、ALT、AST、TBIL水平降低;与柴丙组比较,双环醇、四逆散、六君子汤组ALP水平升高,柴甲组AST水平升高。3.TGR5mRNA相对表达量（RT-PCR法）结果显示:与模型组比较,双环醇组结肠TGR5水平降低;六君子汤、柴甲、柴乙、柴丙组肝脏TGR5水平升高,结肠TGR5水平降低。与柴丙组比较,双环醇、四逆散组肝脏TGR5水平降低,结肠TGR5水平升高。4.TGR5阳性表达（免疫组化法）结果显示:与模型组比较,各给药组均能提高肝脏TGR5水平,降低结肠TGR5 水平;与柴丙组比较,四逆散、柴甲组肝脏TGR5 水平降低,柴乙组TGR5水平升高。5.肠黏膜紧密连接蛋白结果显示:与模型组比较,双环醇组Zo-1、Claudin-1水平升高;四逆散组Claudin-1水平升高;六君子汤、柴甲、柴乙、柴丙组结肠Zo-1、Claudin-1 水平升高。与柴丙组比较,双环醇、四逆散、六君子汤组Zo-1水平降低。6.PCNA阳性表达结果显示:与模型组比较,双环醇、四逆散、柴甲、柴丙组PCNA水平升高;与柴丙组比较,六君子汤、柴乙组PCNA水平降低。7.杯状细胞结果显示:与模型组比较,各给药组均能提高结肠杯状细胞数量;与柴丙组比较,双环醇、四逆散、六君子汤组杯状细胞数量明显减少。结论1.对于肝郁叠加肝损伤大鼠,TGR5和肠黏膜紧密连接蛋白、PCNA、杯状细胞数量等指标水平的改变,揭示了“见肝之病,知肝传脾”的生物学依据。2.健脾、疏肝健脾、先疏肝再疏肝健脾、先健脾再疏肝健脾不同治疗方法,在减轻肝损伤同时,能促进肠道黏膜屏障修复;先健脾再疏肝健脾方法优于其余各给药方法。3.本课题研究结果证明,“当先实脾”治疗方法为“见肝之病,知肝传脾,当先实脾”的理论提供了实验依据。
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