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本文主要从以下几个部分展开论述： 第一部分 Bmi-1在胃肠肿瘤中对西妥昔单抗和伊立替康治疗敏感性的影响及机制研究 背景:Bmi-1是PcG家族的一员，是一种转录抑制因子。Bmi-1在许多肿瘤中高表达，且与不良预后有关。已发现Bmi-1与胰腺癌化疗抵抗相关，在乳腺癌中还可以诱导放疗抵抗。但至今仍无Bmi-1与西妥昔单抗(C225)治疗敏感性的研究报道。 目的：在于探索Bmi-1在胃肠肿瘤中对西妥昔单抗和伊立替康治疗敏感性的影响，为之后肿瘤靶向治疗的新靶点提供基础。 方法:利用脂质体Lipofectamine2000分别将Bmi-1过表达质粒和Bmi-1 siRNA和转染至MKN45、SGC7901和HT-29细胞，从而改变细胞内Bmi-1表达水平。利用脂质体Lipofectamine2000将miR-21过表达质粒和Bmi-1 siRNA共转染至MKN45细胞。采用不同浓度的C225或化疗药伊立替康处理细胞，CCK-8法检测细胞毒性。回顾性分析47例采用二线C225联合FOLFIRI方案(伊立替康+5-Fu)化疗的晚期胃癌患者，免疫组化方法检测胃癌患者肿瘤标本Bmi-1表达，比较Bmi-1阴性组与阳性组患者的缓解率差别。 结果:1.上调Bmi-1后，MKN45细胞对西妥昔单抗敏感性无显著变化(P＞0.05)，对伊立替康敏感性下降(P＜0.05)。2.上调Bmi-1后，SGC7901细胞对西妥昔单抗和伊立替康敏感性均下降(P＜0.05)。3.下调Bmi-1后，MKN45和SGC7901细胞对两妥昔单抗和伊立替康敏感性均升高。4.共转染实验中，上调miR-21可逆转Bmi-1下调所带来的MKN45细胞对西妥昔单抗和伊立替康敏感性的升高;5.肿瘤组织中Bmi-1阴性对比Bmi-1阳性，ORR略有提高，但未达到统计学意义(P=0.226)。 结论:Bmi-1高表达可引起胃肠癌细胞对西妥昔单抗及伊利替康的治疗敏感性下降;Bmi-1低表达可引起胃肠癌细胞对西妥昔单抗及伊利替康的敏感性上升;Bmi-1通过miR-21对西妥昔单抗和伊立替康敏感性产生影响。 第二部分 miR-616在胃肠肿瘤中对西妥昔单抗治疗敏感性的影响 背景:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋白，是目前靶向治疗的主要靶点之一。西妥昔单抗(cetuximab，C225)是抗EGFR的人鼠嵌合单克隆抗体，已被广泛应用于转移性结直肠癌患者的一线、二线或三线治疗中。目前，西妥昔单抗明确的疗效预测因子包括K-RAS与N-RAS基因。但研究显示，仅有部分RAS野生型mCRC患者对C225有效。miRNA是一类内生的、长度约19-25个核苷酸的非编码小RNA，参与了细胞分化、细胞周期的进展以及细胞凋亡的调控。最近的研究发现一些miRNA与抗EGFR治疗的敏感性相关。我们拟研究miR-616与西妥昔单抗靶向治疗敏感性的关系，为miR-616成为靶向治疗的新靶点提供一定依据。 方法:qRT-PCR检测胃肠癌细胞与正常胃肠粘膜细胞miR-616的表达水平;利用脂质体Lipofectamine2000将miR-616的模拟物mimics、阻遏物inhibitors转染至MKN45和HT-29细胞;采用不同浓度的C225或化疗药伊立替康处理细胞，CCK-8法检测细胞毒性。软件预测结合qRT-PCR验证筛选miR-616可能的靶基因。 结果:1.miR-616在胃肠癌细胞中高水平表达。2.转染miR-616 mimics后，MKN45对西妥昔单抗敏感性下降(P＜0.05)，对伊立替康敏感性无显著变化(P＞0.05)。3.转染miR-616 mimics后，HT-29细胞对西妥昔单抗敏感性显著下降(P＜0.01)，对伊立替康敏感性无显著变化(P＞0.05)。4.转染miR-616 inhibitors后，MKN45对西妥昔单抗敏感性略有上升，但无显著差异(P＞0.05); HT-29对西妥昔单抗敏感性显著上升(P＜0.05);两种细胞对伊立替康敏感性均无显著变化(P＞0.05)。5.MKN45细胞、HT-29细胞转染miR-616 mimics后， TP53BP2 mRNA表达水平明显降低(P＜0.01);转染miR-616 inhibitor后，TP53BP2 mRNA表达明显增加(P＜0.01)。 结论:miR-616在胃肠癌细胞中高表达。miR-616在胃肠癌细胞中与西妥昔单抗的治疗敏感性有关，与伊立替康治疗敏感性无关。TP53BP2为miR-616潜在的靶基因。