【摘 要】
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目的:探讨G6PD(Glucose-6-phosphate-dehydrogenase)基因在多发性骨髓瘤(MM)中的表达与硼替佐米(BTZ)治疗敏感性的关系,为MM患者提供新的治疗靶点及思路。方法:1.从GEO数据库获取正常人以及MM病人的G6PD基因表达信息,利用生物信息学方法分析MM病人与正常人G6PD基因的表达差异及G6PD基因表达水平与MM生存预后的关系。2.选择ARP-1、OCI-My
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目的:探讨G6PD(Glucose-6-phosphate-dehydrogenase)基因在多发性骨髓瘤(MM)中的表达与硼替佐米(BTZ)治疗敏感性的关系,为MM患者提供新的治疗靶点及思路。方法:1.从GEO数据库获取正常人以及MM病人的G6PD基因表达信息,利用生物信息学方法分析MM病人与正常人G6PD基因的表达差异及G6PD基因表达水平与MM生存预后的关系。2.选择ARP-1、OCI-My5、6-ANBL BR三株MM细胞株,CCK8法检测BTZ和G6PD基因抑制剂6-Aminonicotinamide(6-AN)联用的协同指数。3.将G6PD蛋白编码序列与p CDH-CMV-MCS-EF1a质粒、2条G6PD sh RNA序列与p LKO-tet-on质粒通过酶切-连接-转化-鉴定等步骤构建过表达及干扰载体,HEK293T细胞包装病毒,构建G6PD基因稳定过表达及敲减的细胞株。4.Western Blot验证稳转株细胞中G6PD基因过表达及敲减的效率。5.CCK8法测定稳转株细胞BTZ的IC50,采取台盼蓝染色计数法以及软琼脂克隆形成法检测稳转株细胞的增殖及克隆形成能力。6.稳转株细胞用BTZ处理后Western Blot法检测全长及剪切caspase-3的表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:1.GEO数据库分析得知MM患者中G6PD基因表达水平高于正常人(P值小于0.05),且高表达的患者总体生存期更短。2.在三株MM细胞株中将6-AN与BTZ联用后均有协同效应(CI值均小于1)。3.G6PD过表达细胞株在48小时后的增殖能力明显强于对照组,而从96小时后开始G6PD敲减细胞株的增殖能力则要弱于对照组,G6PD过表达细胞在补加不含BTZ或含BTZ的琼脂培养基中克隆形成率均明显高于对照组细胞(P值小于0.05)。4.在BTZ浓度为2至64noml/L区间内,G6PD过表达细胞株在相同浓度BTZ处理后细胞存活率要明显高于对照组,而在浓度为1至16nmol/L区间内,G6PD敲减细胞株在相同浓度BTZ处理后的存活率要明显低于对照组(P值小于0.05)。5.G6PD过表达可抑制BTZ所诱导的MM细胞凋亡,而敲减G6PD可促进BTZ诱导的MM细胞凋亡。结论:1.G6PD基因促进多发性骨髓瘤细胞的增殖及克隆形成能力。2.G6PD基因增强多发性骨髓瘤细胞对硼替佐米治疗的耐受性。
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