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目的：①探讨HBV 刺激不同TLR3表达水平的BeWo细胞后，各组BeWo细胞TLR3蛋白表达与HBV 感染与复制的关系；②探讨HBV 刺激不同TLR3表达水平的BeWo细胞后，各组BeWo细胞分泌TLR3信号转导过程中相关细胞因子的水平与HBV 感染与复制的关系。
方法：①利用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将抑制TLR3基因的质粒pEGFP-Genesil-tlr3 转染入BeWo细胞，以下调BeWo细胞的TLR3表达；用40ug/mlPolyI:C 刺激BeWo细胞以上调TLR3蛋白的表达，然后用HBV 感染各组细胞；②本次实验采用BeWo细胞与100ul HBV DNA 含量为5.0×106 （copies/ml）的病人血清共同培养作为HBV 感染的方法，共设立四个组：正常对照组、HBV 刺激正常细胞组、HBV刺激抑制TLR3 质粒转染组、PolyI:C+HBV 刺激组，于HBV 刺激各组细胞8h、16h、24h、48h后收集各组细胞的培养上清及细胞进行下一步实验；③用流式细胞术（FACS）测定以上各组细胞TLR3蛋白的表达量，并分析不同HBV 刺激时间点下TLR3蛋白表达水平的变化；用荧光定量PCR 法检测HBV 刺激后各组细胞培养上清中的HBV DNA 载量；④用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞培养上清中IL-10、TNF-α、IFN-β的表达。
结果：① PolyI:C 刺激BeWo细胞后，TLR3蛋白表达量增加，其平均荧光强度为65.11±2.73，正常对照组细胞为53.27±4.45，差异有统计学意义（t=-4.536，P<0.05）。② 将抑制TLR3的质粒（pEGFP-Genesil-tlr3）用脂质体转染法转染入BeWo细胞后，其平均转染效率为50.24％。③ 用FACS 检测不同时间点(8h、16h、24h、48h)HBV 刺激各组BeWo细胞的TLR3蛋白表达量，其在四个实验组中的4个不同时间点上差异均有统计学差异（P<0.05）。正常对照组BeWo细胞在4个时间点上TLR3蛋白平均荧光强度分别为52.88、53.78、55.07、54.70；HBV 刺激BeWo细胞可使TLR3蛋白水平升高，在8h为62.50，16h为69.65，24h为71.78，48h为73.49，且随时间变化TLR3蛋白表达水平有升高趋势；PolyI:C+HBV 刺激组TLR3蛋白表达量高于正常对照组及HBV 刺激正常细胞组，8h为77.27，16h为85.36，24h为91.26，48h为88.27，在24h时TLR3蛋白表达量达到高峰；HBV 刺激抑制TLR3 质粒转染组TLR3蛋白表达量先下降再升高，其在8h为46.19，16h为45.96，24h为46.34，48h为49.55，与正常对照组相比，除在48h差异无统计学意义（P>0.05）外，其他时间点均有统计学差异（P<0.05）。④ 用荧光定量PCR 法检测HBV 刺激正常细胞组、PolyI:C+HBV 刺激组和HBV 刺激抑制TLR3 质粒转染组的不同HBV 刺激时间点（8h、16h、24h、48h）上各组细胞培养上清中HBV DNA 拷贝数，结果显示三组间差异在4个时间点上均有统计学意义（P<0.05），且各组均随着HBV 刺激时间的延长，HBV DNA 拷贝数降低。与HBV 刺激正常组相比，PolyI:C+HBV 刺激组HBV DNA 拷贝数较低，HBV 刺激抑制TLR3 质粒转染组的HBVDNA 拷贝数较高。⑤在HBV 刺激的4个时间点(8h、16h、24h、48h)上，PolyI:C+HBV 刺激组分泌细胞因子IL-10、TNF-α、IFN-β的水平比HBV 刺激正常细胞组高，差异均有统计学意义（P<0.05）；HBV 刺激质粒转染组分泌的细胞因子水平低于HBV 刺激正常细胞组，不同时间点上差异也均有统计学意义（P<0.05）。随着HBV 刺激时间的延长，TNF-α表达水平在8h 开始上升，24h 达到高峰后开始下降；IL-10和IFN-β的表达水平在PolyI:C+HBV 刺激组16h后上升幅度较大，其余各组上升较为缓慢。
结论：①HBV 刺激BeWo细胞后其TLR3蛋白表达增加；PolyI:C上调BeWo细胞TLR3蛋白表达水平后在HBV 刺激下，TLR3蛋白表达量进一步升高；抑制TLR3 质粒转染的BeWo细胞在HBV 刺激下TLR3蛋白表达量降低；同时HBV 刺激后各组细胞培养上清中HBVDNA 拷贝数随着TLR3蛋白表达量的升高而降低，从而说明TLR3在清除HBV 感染与抑制HBV 复制中起到重要作用。②HBV 刺激能诱导BeWo细胞分泌细胞因子IL-10、TNF-α和IFN-β，PolyI:C 刺激增强了BeWo细胞分泌细胞因子的能力，抑制TLR3 质粒转染的BeWo细胞在HBV 刺激下其细胞因子分泌能力下降，说明TLR3是通过诱导BeWo细胞分泌其相关信号转导途径的细胞因子而发挥抗HBV 感染的能力。