鲤鱼体细胞系的构建及鱼类核移植技术的初步研究

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本文以鲤科鱼类鲤鱼和金鱼为实验材料,取鲤鱼吻端上皮及鳍条组织进行体外培养,并对其进行传代建成了体细胞系,分析了建系过程中培养细胞的生物学特性,其中包括细胞形态学分析、细胞生长曲线的绘制、克隆生成率的检测、细胞对温度适应性的观察、细胞染色体数目的统计及其细胞冻存、复苏程序的摸索等。同时利用继代培养细胞做供体移入鲤鱼和金鱼的具核未受精卵中。实验结果如下:1.建立了鲤鱼吻端上皮细胞和尾鳍细胞系,现已传至第65代。2.分析了原代培养细胞及继代培养细胞的生物学特性。①形态学观察,细胞在培养过程中呈梭形细胞增多的趋势。②从绘制的生长曲线来看,继代培养细胞在48-72h期间生长最旺盛,分裂速度较快。③克隆形成率的计算结果显示,吻端上皮和尾鳍第31代细胞克隆生成率都在70%以上。④对细胞对温度适应性观察可见,鲤鱼细胞对温度的适应性很强,并且对低温的耐受力大大超过对高温的耐受力。⑤细胞染色体数目统计表明,原代细胞染色体数目和继代培养细胞染色体数目均为2n=100,为正常的二倍体,未出现变异。⑥在冻存、复苏过程中,我们采取了逐步降温及其悬至液氮罐口两种程序,同时使用甘油和DMSO(二甲基亚砜)两种冻存液,对冻存前、复苏后细胞进行了计数统计,结果为逐步降温和使用DMSO冻存的细胞复活率稍高于吊至液氮罐口和使用甘油的方法,复苏后细胞形态学没有变化。3.采用继代培养到第4-10代的鲤鱼体细胞为供体,鲤鱼和金鱼未受精具核卵为受体,进行移核试验,最终获得发育至原肠期的胚胎。这是鲤鱼体细胞核移植的首次报道。
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