华中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.）隶属于五味子科（Schisandraceae）五味子属（Schisandra）的传统药材,具有补肾宁心、收敛固涩、益气生津等功效。由于过度采摘砍伐以及气候变化等影响,野生华中五味子资源及适宜生境逐渐减少,因此对华中五味子保护和可持续利用势在必行。作为一种雌雄异株植物,华中五味子主要药用部位为果实,而雌雄鉴别仍是未解决的一大难题,因此,开展其性别的研究有利于华中五味子的育种与引种栽培,具有现实意义。本研究以华中五味子花及雌、雄株叶片为材料,从同工酶酶谱带、克隆华中五味子性别相关基因AP3、PI及其表达量差异上,揭示华中五味子雌、雄株之间的差异,为华中五味子雌、雄株的区分提供方法和实验数据支撑。本研究的主要结论如下:1.华中五味子雌雄株四种同工酶（超氧化物歧化酶（SOD）同工酶、过氧化物酶（POD）同工酶、酯酶（EST）同工酶、多酚氧化酶（PPO）同工酶）酶谱存在差异,其中SOD同工酶有两条（SOD6和SOD7）雌株特有酶带,三条（SOD2、SOD3和SOD5）雄株特有酶带;POD同工酶有两条（POD2和POD4）雌株特有酶带,一条（POD3）雄株特有酶带;EST同工酶有一条（EST2）雄株特有酶带;PPO同工酶有一条（PPO2）雌株特有酶带。同工酶酶谱带可作为华中五味子性别鉴定的参考依据。2.同源克隆与RACE技术结合克隆得到华中五味子AP3基因cDNA全长与PI基因保守片段及3’末端,其中AP3基因CDS序列长591bp,编码197个氨基酸;PI基因保守片段299bp,3’末端671bp。经BLAST比对,华中五味子AP3和PI基因与日本五味子（Kadsurajaponica）KjAP3、KjPI基因同源性最高,分别为99%和95%,最终分别命名为华中五味子SsAP3和SsPI基因,其中SsAP3的GeneBank登录号为MN908946。3.蛋白结构分析表明华中五味子SsAP3蛋白为稳定的核定位亲水蛋白,蛋白磷酸化以丝氨酸为主。进化分析表明华中五味子SsAP3与日本五味子及八角科（Illiciaceae）的美洲八角（Illicium floridanum）、红茴香（I.henryi）、小叶八角（I.parvifolium）及莽草（I.anisatum）4个物种一起聚在发育树近基部位置,表明五味子科为植物起源演化原始类群,且与八角科有较近的亲缘关系。4.实时荧光定量PCR结果表明华中五味子雌株与雄株叶片中SsAP3基因与SsPI基因表达量存在差异,雄株SsAP3基因与SsPI基因的表达量均极显著高于雌株（P<0.01）。SsAP3和SsPI基因可能为华中五味子性别分化的原因之一。本研究初步揭示了华中五味子雌、雄株在4种同工酶以及性别相关基因SsAP3和SsPI表达量的差异,为华中五味子性别鉴定提供了形态学以外的鉴定依据,为扩大育种与栽培中雌雄鉴别需求,提供了一定的理论依据和实验数据支持,同时也具有重要的实用价值。