【摘 要】
:
研究背景:凋亡是细胞发生的一种程序性死亡,能被烟草提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱发,导致急性肺损伤的发生,但具体机制尚不明确。NLRP3(nucleotide-like receptor pyrin domain-containing protein 3)炎症小体是胞内的多蛋白体复合物,参与多种急慢性呼吸系统疾病的发生发展。研究目的:本研究旨在探讨NLRP3在C
论文部分内容阅读
研究背景:凋亡是细胞发生的一种程序性死亡,能被烟草提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱发,导致急性肺损伤的发生,但具体机制尚不明确。NLRP3(nucleotide-like receptor pyrin domain-containing protein 3)炎症小体是胞内的多蛋白体复合物,参与多种急慢性呼吸系统疾病的发生发展。研究目的:本研究旨在探讨NLRP3在CSE诱导的大鼠II型肺泡上皮细胞(RLE-6TNs)凋亡中的作用机制。方法1.采用不同浓度CSE处理RLE-6TNs 24小时(hour,h)后,采用免疫印迹(western blot)技术检测凋亡执行蛋白Cleaved caspase-3的表达情况;再选取最佳浓度CSE,分别处理RLE-6TNs 0h,12h,24h,48h,使用western blot技术检测Cleaved caspase-3的表达情况。2.将RLE-6TNs分为空白对照组和2%CSE组,采用定量逆转录聚合酶链式反应(Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)和western blot技术检测NLRP3在转录及蛋白水平的表达情况;使用荧光显微镜观察CSE对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。3.将细胞分为2%CSE组,不同浓度MCC950预处理组,western blot技术检测MCC950对CSE上调的NLRP3的影响;在空白对照组,2%CSE组,2%CSE+MCC950组三组细胞中,使用western blot技术检测MCC950对CSE上调的Cleaved caspase-3的影响;采用流氏细胞术检测MCC950对CSE诱导的细胞凋亡的影响。4.用乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)预处理2h后,加入2%CSE再处理24h,使用荧光显微镜观察NAC对CSE上调的胞内ROS水平的影响;western blot方法检测NAC对CSE上调的NLRP3、Cleaved caspase-3的影响。结果1、Western blot检测结果显示:CSE处理后的RLE-6TN细胞内凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达升高,且其表达随着烟草提取物浓度的升高而升高,以2%CSE最为显著;Cleaved caspase-3的表达量随着CSE处理时间的延长而升高,以24h最为明显。2、Western blot及q RT-PCR检测结果显示:2%CSE在转录及蛋白水平促进细胞内NLRP3的表达;荧光显微镜结果显示:2%CSE提高胞内ROS水平。3、Western blot检测结果显示:与2%CSE组相比,不同浓度的MCC950都能降低CSE诱导升高的NLRP3的表达,且当浓度为10μM时效应最明显;MCC950降低CSE诱导升高的Cleaved caspase-3的表达;流氏细胞术检测结果显示:MCC950能降低CSE诱导的细胞凋亡率。4、荧光显微镜结果显示:NAC降低CSE诱导升高的胞内ROS水平;Western blot检测结果显示:NAC降低CSE诱导升高的NLRP3、Cleaved-caspase 3的表达。结论1、CSE以浓度及时间依赖性的方式诱导RLE-6TNs凋亡。2、ROS/NLRP3通路参与了CSE诱导的RLE-6TNs凋亡。3、抑制ROS/NLRP3信号通路能部分逆转CSE诱导的RLE-6TNs凋亡。
其他文献
第一部分:心脏周围脂肪与射血分数保留心衰患者动脉僵硬度的相关性研究目的:探索在射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)患者中,心脏周围脂肪与动脉僵硬度的相关性。方法:为探讨心脏周围脂肪与HFpEF患者动脉僵硬度的关系,本研究共纳入从2020年10月至2021年1月于重庆医科大学附属第一医院心内科就诊,并确诊为H
虚拟现实由于颠覆了传统新闻的用户认知体验而被称为“终极的媒介技术”,然而学界对用户的认知规律尚缺少系统的研究。本文以新近推出的两部虚拟现实新闻作品为分析对象,采用心理学控制实验和E-prime反应时测试的方法,探索用户的虚拟现实新闻体验和认知态度。研究发现,个体沉浸度显著影响了虚拟现实新闻作品的体验,而先前的设备使用经验和对新闻内容的熟悉程度并未显著影响观看新闻作品时的沉浸体验。通过营造沉浸体验、
目的:本研究拟通过检测骨髓增生异常综合症(MDS)与继发性急性髓系白血病(AML/MDS)患者骨髓标本中硫酸肝素蛋白多糖2(Heparan Sulfate Proteoglycan 2,HSPG2)表达变化,分析其与疾病临床特征及预后的关系。体外实验探究敲减HSPG2对AML/MDS细胞株的增殖、凋亡、周期等功能的影响,初步探索其对细胞凋亡、增殖等相关通路的作用机制。同时还将观察探究西达本胺(CD
目的:本研究旨在探讨GPR56在糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)中的表达,及其在糖尿病肾小管细胞损伤中的作用及机制。方法:收集DKD患者及对照肾组织切片,构建DKD小鼠模型及糖尿病肾小管细胞模型。利用免疫组织化学染色、western blotting(WB)方法明确GPR56在DKD患者、DKD小鼠肾组织、糖尿病肾小管细胞中的表达。体外构建GPR56基因敲降的糖
目的:探讨棕榈酸(Palmitic acid,PA)对人主动脉内皮细胞(Human aortic endothelial cells,HAECs)内皮间质转化的影响及机制。方法:常规培养原代人主动脉内皮细胞,以牛血清白蛋白溶液(Bovine serum albumin,BSA)作为溶剂对照组,用不同浓度(200、300、400、500μM)棕榈酸刺激HAECs 24小时,分别使用CCK-8试剂盒(
背景:肉碱棕榈酰转移酶-2(CPT2)的下调已被证明与多种癌症的发生与发展息息相关,但对其在结直肠癌中的表达,生物学功能和潜在的机制知之甚少。方法:通过对癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达综合数据库(GEO)中结直肠癌数据集的生物信息学分析,探讨结直肠癌中CPT2的表达,CPT2与临床病理特征之间的关系,以及CPT2与结直肠癌患者的总体生存率(OS)的关系。Cox比例风险回归模型被用来探索结直肠
背景:卡托普利抑制试验(CCT)、坐位生理盐水输注试验(SSIT)、口服钠负荷试验(OSLT)和氟氢可的松抑制试验(FST)是诊断原发性醛固酮增多症(原醛症)(PA)的推荐方法。这些确诊试验在安全性和复杂性方面有所不同。目前尚不清楚更安全、更简单的试验在诊断性能上是否可与更复杂的试验相媲美。我们旨在量化这四种测试结果之间的一致性和诊断效力。方法:选择醛固酮/肾素比值筛查阳性的高血压患者,至少完成一
目的:采用Neuropad定量检测法,提高汗印法诊断糖尿病周围神经病变的诊断效能。方法:本试验为诊断试验,纳入2型糖尿病患者并收集相关临床数据资料,包括性别、年龄、糖尿病病程及家族史、吸烟及饮酒史、体质指数(BMI)、血压、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、血脂、甲功、肾功、糖尿病神经病变体征评分(NDS)及糖尿病神经病变症状评分(NSS)等临床资料。对筛选入组的患者完成汗印法(N
虚拟现实技术作为培养学生共情的新型教育形式广受关注,但现有研究对虚拟现实是否比传统教育形式更能引发学生共情存在争议。为明确虚拟现实教学对学生共情意识与能力的影响及其与传统教学方式的差异,本研究采用元分析方法系统评价19项随机对照实验。结果显示,虚拟现实教学能有效提高学生的共情水平。调节变量分析结果显示,虚拟现实教学共情效果比面对面教学效果更好,但与平面视频教学之间的差异不具有统计学意义;知识学习类
目的:吉非替尼是能够显著改善非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的分子靶向药,虽然对于治疗EGFR突变的非小细胞肺癌具有显著的疗效,但最终大多数患者会发生耐药,从而限制其临床应用,目前吉非替尼耐药机制尚未完全阐明。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种核酸转移酶,通过抑制PARP1-Timeless复合物的形成抑制DNA同源重组,降低基因组稳定性,促