Ⅰ型鸭肝炎病毒LY0801株的分离鉴定及致病性研究

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Ⅰ型鸭肝炎病毒是雏鸭一种急性和高度致死性传染病(Woolcock, P.R. et al. 2003),主要感染1~3周龄雏鸭,死亡率高达90%以上。该病1949年最早报道于美国长岛,并于1950年用鸡胚分离到DHV-Ⅰ(Levine, P.P. et al. 1950)。随后英国,加拿大,德国,埃及,印度,日本,韩国,中国台湾等地相继报道,19世纪60年代中国大陆开始发现DHV-Ⅰ。目前该病已经成为影响世界水禽养殖业的重要疫病之一。本研究共分为四个部分:第一部分山东省DHV-Ⅰ的分离鉴定及单因子血清制备本研究收集自2007年3月到2008年1月山东不同地区疑似鸭肝炎病例病死鸭肝脏组织,通过病毒分离、RT-PCR检测以及标准血清中和实验,表明成功分离到11株来自山东不同地区的DHV-Ⅰ。用这11株DHV-Ⅰ免疫7日龄SPF鸡分别制备了抗各株病毒的单因子血清,中和实验表明单因子血清对本毒株中和效果良好。第二部分DHV-ⅠLY0801分离株的致病性研究本研究对LY0801株DHV-Ⅰ进行了鸭胚攻毒实验和动物回归实验,测定其鸭胚ELD50=106.46/ 0.2ml,雏鸭LD50=106.09/ 0.2ml,证明该分离株为一株DHV-Ⅰ强毒。单因子血清部分交叉保护实验结果表明DHV-ⅠLY0801株为2007年~2008年山东流行代表株。第三部分DHV-ⅠLY0801分离株全基因序列测序与分析根据国内外已经发表的DHV-Ⅰ基因序列,设计9对特异性引物,利用重叠RT-PCR技术扩增出LY0801株的全基因组序列,GeneBank登录号为FJ436047。该株病毒基因组全长7690nt(3’端ploy(A)尾巴除外),与GeneBank中另外已登录的36株传统DHV-Ⅰ基因组序列同源性为93.4%~95.2%,与N-DHV 90D和04G株的同源性为71.8%和71.7%。LY0801株的Polyprotein基因编码2249个氨基酸,其氨基酸序列与GeneBank中已登录的36株传统DHV-Ⅰ的同源性为97.5%~98.7%。第四部分DHV-ⅠLY0801分离株卵黄抗体的制备与应用本研究研制了针对LY0801株DHV-Ⅰ的卵黄抗体,通过动物实验和临床应用证明其对生产中流行的DHV-Ⅰ感染具有良好的预防和治疗作用。
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