百合杂交育种和胚拯救培养的研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lili1006
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百合是最重要的球根花卉之一。我国是百合资源的重要起源地之一,然而百合育种工作起步较晚,为促进我国百合育种工作的快速发展,利用从国外引进的优良百合品种进行杂交育种,是迅速培育具有自主知识产权的新品种,满足国内市场需要的迫切要求。本文选用从国外引进的十几个百合优良品种为材料,开展了从杂交育种到杂种胚拯救和杂交苗的早期鉴定等方面研究,得到结果如下:‘Calvados’,‘Action’,‘Siberia’,‘Aktiva’,‘Prato’,‘Brunello’6个品种的花粉萌发率平均值都在60%以上,最高的‘Action’的花粉萌发率达到了90.1%,均可作为杂交父本材料,‘Pollyanna’花粉萌发率较低,为40.93%。以坐果率和有胚率为指标,对12个杂交组合进行了杂交亲和性分析,结果表明,东方百合各品种内杂交亲和性较高,其中,‘Calvados’作母本时亲和力最高,坐果率可以达到50%以上,有胚率在10%以上,‘Siberia’作母本时亲和力最差。亚洲百合各品种内杂交亲和性差异比较大,Pollyanna’בBrunello’的坐果率最高,为26.17%,有胚率39.29%,其次为‘Prato’בBrunello’组合,坐果率为7.50%,有胚率为100%,‘Pollyanna’בPrato’组合坐果率为4.21%,有胚率为25.00 %,‘Prato’בPollyanna’组合没有得到杂交后代。麝香百合与东方百合种间杂交,没有得到杂交后代常规授粉方法对‘Calvados’בSiberia’、‘Pollyanna’בBrunello’的座果率和有胚率都是最高的,前者座果率和有胚率达到了99.33%和85.3%,后者座果率和有胚率分别74.00%和21.26%。在克服远缘杂交‘Elegance’בSorbonne’的受精障碍时,通过改变授粉时间和涂抹亲本柱头粘液的共计12种方法都不能克服受精障碍,未能得到杂交后代。在授粉45d以前,早期进行胚拯救的方式宜采用整果培养比子房切片好,整果培养‘Aktiva’בSiberia’得到了22个胚,‘Medusa’בJanna’得到了24个胚,子房切片培养促进了子房壁分化为小鳞茎,没有得到杂交胚。取果时间最早可以到杂交授粉后14d,然而21d以后较好蒴果生长发育会更好。蔗糖浓度为9.00%时,杂交蒴果整果培养的成活率最高,达到100%,且生长量最大。胚培养时,7种MS培养基对杂交胚的萌发和生长途径有很大影响,若以快速分化小鳞茎为指标,则最佳培养基MS+0.01mg.L-1NAA+3%/6%蔗糖,若以快速繁殖为指标,则最佳培养基为MS+0.1 mg.L-1NAA+0.5/1.O mg.L-1BA+3%/6%蔗糖。杂种胚刚剥离时,先在黑暗条件下培养‘Calvados’בSiberia’杂种胚7~21d,后移植到光下培养,有利于杂交苗后期生长和生根,但当黑暗培养时间超过28d以后就会表现出减少了生根和苗高。用SRAP分子标记鉴定百合杂种1代时,可用CTAB法提取百合叶片DNA,可以达到25ng.ul-1,模版DNA为20ng时扩增效果最好。从56对引物筛选出了能够产生亲本特征带的16对SRAP引物,分别为em1/me5; em1/me7; em1/me8; em2/me6; em3/me5; em3/me7; em4/me8; em5/me6; em5/me5; em5/me7; em5/me8; em6/me2; em6/me4; em6/me8; em7/me1; em7/me8。他们都能够很好的扩增出亲本材料的谱带,且重复性好,对百合杂交种的早期鉴定打下基础。引物对40(em5/me8)可对‘Calvados’בSiberia’亲本及其F1代进行早期的鉴定,对SRAP扩增条带的聚类分析结果表明杂交苗介于亲本遗传距离之间。采用引物对14(em2/em6)对‘Siberia’בAction’和‘Action’בSiberia’的亲本和杂交苗可以进行早期鉴定,引物对44(em6/em4)对‘Calvados’בAction’和‘Action’בCalvados’的亲本和杂交苗可以进行早期鉴定。
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