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耐药菌感染正在全球蔓延,感染率和死亡率正在逐年上升,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)、耐万古霉素肠球菌(Vancomycin-resistant Enterococci, VRE)的出现和流行,严重威胁着人类的身体健康。根据中国CHINET细菌耐药性监测网数据,近几年MRSA分离的比例均维持在50%以上。传播广泛、多重耐药使得MRSA的治疗变得更加困难和复杂,已成为全球性公共卫生问题。利奈唑胺是第一个获得美国食品和药物管理局(FDA)批准用于临床的嗯唑烷酮类抗生素,并且是目前此类中唯一应用于临床的药物,独特的化学结构和抗菌作用机制为对抗各种难治性耐药菌带来了希望。利奈唑胺对大多数的革兰阳性致病菌表现出很强的抗菌活性,如MRSA、VRE、多重耐药肺炎链球菌等。然而该药应用临床后不久便在多个国家的临床菌株中出现了耐药性,因此,研究利奈唑胺的耐药机制对临床医师了解和掌握利奈唑胺耐药菌形成的原因和机制,进而合理使用该药具有重大意义。研究目的：本实验在体外诱导金黄色葡萄球菌对利奈唑胺耐药,建立诱导耐药株模型,初步探讨其耐药性的形成机制,对比观察并分析诱导前后菌株的适应性及对其他抗生素的耐药性变化,为今后更深入、全面的耐药机制研究奠定基础。材料与方法：收集天津市某三级甲等医院门诊及住院患者的血、痰、胸腹腔引流液、脓液及眼、耳、鼻等部位分泌物临床标本中分离的金葡菌。细菌鉴定采用API葡萄球菌鉴定系统及金黄色葡萄球菌乳胶凝集法,应用mecA基因扩增法筛选MRSA菌株；选取9株对利奈唑胺敏感性较低的临床分离金葡菌,其中5株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methicillin-susceptible Staphylococcus aureus, MSSA),4株为MRSA,以金葡菌ATCC25923作为质控菌株。采用利奈唑胺浓度2倍递增的方法对9株临床分离金葡菌(5株MSSA,4株MRSA)和质控菌株ATCC25923进行体外诱导；采用PCR基因技术扩增诱导前后金葡菌23S rRNA的V区基因并测序、Blast比对,分析突变与耐药性的关系；比较诱导前后金葡菌的适应性以及对抗菌药物的耐药性变化。结果：经过利奈唑胺长时间体外诱导后,10株实验菌株中有9株诱导出利奈唑胺耐药性,且耐药性稳定。其中,Sa10经诱导后MIC值最高,达到128mg/L,与其亲代敏感株相比,MIC值增加了64倍,质控菌ATCC25923(Sal)经诱导后MIC值也增高了16倍(64mg/L),Sa8诱导后MIC值最低(8mg/L),其余诱导后金葡菌的MIC值均16mg/L。扩增金葡菌23S rRNA的V区基因片段,测序发现有5株耐药菌发生了突变,分别为：诱导后菌株ATCC25923(S1,A2531T)、S3(A2289G)、S5(A2289G)、S9(C2691T、A2289G)、 S10(C2474A、A2289G),且第2289位点的突变发生率最高(4/5)。实验中还发现利奈唑胺耐药后金葡菌的菌落和溶血环变小,疑似形成小菌落突变株；菌株倍增时间延长,生长速率减慢；对其他抗菌药物耐药性也发生改变。结论：经利奈唑胺体外长期诱导后金葡菌可以获得稳定耐药性,但同时也产生了适应性代价,其耐药机制与23S rRNA的V区基因突变相关,并且可能有其他耐药机制的参与。