慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary disease,COPD）以持续存在的气流受限和相应的呼吸系统症状为特征,重者引发气道阻塞和气道重构,对患者的生命质量造成严重影响。支气管肺泡灌洗液更能体现小气道炎症和细胞学特征,随着纤维支气管镜在临床的广泛应用,探究慢阻肺稳定期肺泡灌洗液中脱落细胞学特征和其在气道慢性炎症反应中的功能变化,对慢阻肺稳定期的病情演变检测和治疗具有重要意义。中医药防治慢阻肺具有较好的临床疗效,尤其在稳定期的治疗展示出显著优势,但缺乏对慢阻肺稳定期基于脏腑整体功能认识的标本关系探讨。因此,本研究将从文献综述、理论研究、临床研究结合动物实验,探讨基于脏腑整体功能认识的慢阻肺稳定期标本关系及肺脱落细胞学特征。研究目的:1.通过理论研究,全面认识慢阻肺稳定期的脏腑整体功能,阐述基于脏腑整体功能认识的慢阻肺稳定期标本关系。2.通过临床研究,探索慢阻肺稳定期患者的临床标本关系特征及与中医辨证分型诊断的相关性,阐明慢阻肺稳定期以肺脾核心多脏虚为本的脏腑功能特征。3.通过实验研究,基于脏腑整体功能认识的慢阻肺稳定期标本关系,建立不同证型的慢阻肺稳定期病证结合模型,观察不同证型的肺脱落细胞学变化。慢阻肺稳定期以本虚标实为病机特点,探求基于脏腑整体功能认识的慢阻肺稳定期肺脱落细胞学特征。研究方法:1.理论研究:结合中医理论及临床实际,对慢阻肺稳定期的的脏腑整体功能和标本关系进行理论梳理。2.临床研究:通过采集符合纳入标准的231例慢阻肺稳定期患者的基本信息、实验室指标、肺功能结果以及上一年急性加重次数,采用改良版英国医学研究委员会呼吸问卷（mMRC）和慢性阻塞性肺疾病评估测试（CAT）对患者进行分级和评分,基于脏腑整体功能和标本特征对患者进行中医辨证分型诊断,分析慢阻肺稳定期患者临床特征与脏腑整体功能之间的内在联系,并采用多元无序Logistic回归分析上述变量与中医辨证分型诊断的相关关系。3.实验研究:将65只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、COPD脾虚证组、COPD肾虚证组、COPD脾肾两虚证组。除空白对照组外,以证候造模因素叠加疾病造模因素建立不同证型的COPD病证结合小鼠模型,以经口灌服番泻叶（苦寒泻下）,噪声刺激（情志不舒）,隔日饲喂（饥饱失度）,烟雾暴露和气管内滴注脂多糖的复合方式建立COPD脾虚证动物模型;以氢化可的松25mg/kg灌胃,烟雾暴露及气管内滴注脂多糖的复合方式建立COPD肾虚证动物模型;联合应用氢化可的松,经口灌服番泻叶（苦寒泻下）,噪声刺激（情志不舒）,隔日饲喂（饥饱失度）,烟雾暴露和气管内滴注脂多糖的复合方式建立COPD脾肾两虚证动物模型;以烟雾暴露和气管内滴注脂多糖的方法建立COPD模型对照组。造模时间共计15周（105d）,观察小鼠的一般情况,肺功能检测,肺、脾、肾组织大体标本情况,并计算脾、肾系数,对肺组织进行HE染色观察其病理形态改变,并在第5周、第10周、第15周分批收集肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类和计数,观察、分析和比较不同证型的慢阻肺稳定期病证结合模型肺脱落细胞学的组间差异和动态趋势变化。研究结果:1.临床研究:纳入的231例有效慢阻肺稳定期病例中,诊断为肺脾核心肺虚为主证病例59例,肺脾核心脾虚为主证病例90例,肺脾核心两本多脏虚证病例82例。临床研究结果提示,随着慢阻肺稳定期从肺脾核心肺虚为主—肺脾核心脾虚为主—肺脾核心两本多脏虚证型演变,慢阻肺患者年龄逐渐增高、LYM%逐渐降低、肺功能FEV1%逐渐下降、mMRC分级、CAT评分逐渐升高、急性加重次数逐渐增加。Logistic回归模型结果表明,年龄、LYM%、FEV1%是肺脾核心脾虚为主证的独立影响因素;LYM%、FEV1%、mMRC分级、CAT评分是肺脾核心两本多脏虚证的独立影响因素。2.实验研究:动物实验结果提示,一般状态方面,证候造模干预期间,脾虚证组小鼠出现大便稀溏,进食减少,四肢软弱无力,活动减少等表现;肾虚证组小鼠以身体蜷缩,畏寒、喜聚堆,肛温下降,目光呆滞,反应迟钝等为主要特异表现;脾肾两虚证组小鼠出现不同程度的毛发枯槁,倦怠少动,弓背蜷卧,行动迟缓,神态萎靡等以上两组相兼的行为表现。疾病造模干预期间,造模各组小鼠均有一定程度的呼吸急促,弓背,鼻腔分泌物增多。脾虚证组和脾肾两虚证组小鼠在烟雾暴露中期易激惹,躁动跳蹿,甚至出现相互打斗;烟雾暴露后期出现倦怠少动,弓背蜷卧,而以脾肾两虚证组小鼠更为明显。肾虚证组和脾肾两虚证组小鼠烟雾暴露后期出现呼吸加快,时有不规则点头运动,呼吸时胸腹起伏度明显,尿量增多,喜聚堆蜷缩,甚至抽搐,均有一定程度的神态萎靡,脾肾两虚证组小鼠反应更为迟钝。肺功能检测可见,与空白对照组相比,各COPD模型组的呼吸系统动态阻力、动态弹性阻力、肺组织阻尼、肺组织迟滞均明显升高（P＜0.05）,呼吸系统动态顺应性明显降低（P＜0.05）。提示各COPD模型组肺阻塞的程度、肺泡组织的阻塞程度、僵硬程度升高,而肺的扩张能力下降。与模型对照组相比,COPD脾虚证组、肾虚证组、脾肾两虚证组小鼠的肺阻塞程度、肺泡组织的阻塞程度、僵硬程度均升高,肺的扩张能力下降,其中以COPD脾肾两虚证组最为明显（P＜0.05）。而各组小鼠的中心气道阻力差异并不明显,提示疾病干预并未造成中央气道狭窄。脏器组织大体形态及脏器系数方面,空白对照组小鼠的肺、脾、肾组织表面光滑,质地柔软,均未见变色、肿胀及瘀斑。而各模型组的肺组织颜色苍白,并可见肿胀,弹性降低。COPD脾虚证组和脾肾两虚证组小鼠的脾脏光泽黯淡,表面皱褶萎缩,与模型对照组相比脾系数降低（P＜0.05）。COPD肾虚证组和脾肾两虚证组小鼠肾脏颜色较暗,有囊性感,个别小鼠肾脏内含浑浊尿液。与模型对照组相比,COPD脾肾两虚证组肾系数升高最为明显。肺组织病理方面,HE染色显示空白对照组支气管结构正常,肺泡及毛细血管未见异常,间质内无炎症细胞浸润;模型对照组支气管壁增厚,肺泡腔内炎性细胞浸润,局灶性肺气肿形成;与模型对照组相比,COPD脾虚证组、COPD肾虚证组、COPD脾肾两虚证组均有不同程度的粘液栓数目增多、杯状细胞增生和炎性细胞聚集浸润增加,COPD脾肾两虚证组甚至可见肺泡壁破坏,部分肺泡融合形成肺大泡。肺泡灌洗液中脱落细胞方面,在建立COPD疾病模型前期（第5周）,各模型组肺泡灌洗液脱落细胞以淋巴细胞和巨噬细胞为主。其中,与模型对照组相比,COPD脾虚证组和COPD脾肾两虚证组淋巴细胞百分数的增多较为明显（P＜0.05）。在建立COPD疾病模型后期（第15周）,各模型组肺泡灌洗液脱落细胞以巨噬细胞为主。其中,与模型对照组相比,COPD脾虚证组和COPD脾肾两虚证组巨噬细胞百分数的增多较为明显（P＜0.05）。从动态趋势变化来看,淋巴细胞百分数的动态趋势变化:各模型组淋巴细胞百分数呈现先大幅下降、后小幅升高的动态趋势变化,其中以COPD脾虚证组和COPD脾肾两虚证组淋巴细胞百分数降幅较大;中性粒细胞百分数的动态趋势变化:模型对照组和COPD脾虚证组总体呈下降趋势,空白对照组、COPD肾虚证组、COPD脾肾两虚证组总体呈上升趋势,COPD脾肾两虚证组中性粒细胞百分数升高较为显著（P＜0.05）;巨噬细胞百分数的动态趋势变化:COPD脾虚证组和COPD脾肾两虚证组巨噬细胞百分数上升显著（P＜0.05）,空白对照组和COPD肾虚证组巨噬细胞百分数变化并未呈现趋势,模型对照组巨噬细胞百分数虽整体呈缓慢上升趋势,但趋势差异无统计学意义。研究结论:1.根植于临床,坚持治病求本思路,通过恢复脏腑整体功能的协调统一,索因求本调整标本关系,是慢阻肺稳定期的正确施治策略。2.慢阻肺稳定期以“正虚积损,虚实夹杂”为功能特征,脏腑整体功能最终影响患者的预后和疾病转归。3.动物实验研究观察表明,以证候造模因素叠加疾病造模因素可成功制备不同证型的COPD病证结合小鼠模型,证候造模干预在一定程度上复制了人体的证候状态,各不同证型的病症结合模型在生理病理等检测方面具有显著的差异特征。其中,不同证型的病症结合模型肺泡灌洗液脱落细胞特征差异较大,而其中尤以脾肾两虚证组脱落细胞变化显著,中性粒细胞、巨噬细胞百分数较单纯疾病模型组显著上升,且该变化差异与肺功能、肺组织病理结果相吻合。证实以肺脾肾为主的多脏虚损是COPD稳定期的基本病机特点,脏腑整体功能在一定程度上决定着慢阻肺稳定期的发病和演变规律。