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目的：采用核酸扩增和反向点杂交技术检测深圳某市属医院结核杆菌临床分离株及经抗酸染色镜检为阳性的痰标本中结核杆菌耐药突变基因，以了解深圳地区结核病患者对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的耐药突变情况；结核杆菌初始耐药率与获得性耐药率是否存在显著性差异；深圳地区与其它地区结核杆菌耐药谱是否存在显著性差异；并以DNA测序法为金标准，评价核酸扩增和反向点杂交技术检测结核杆菌耐药突变基因的方法学性能。 方法：采用核酸扩增和反向点杂交技术检测264例（初治患者141例，复治患者123例）结核杆菌临床分离株及经抗酸染色镜检为阳性的痰标本中结核杆菌耐药突变基因rpoB、katG、inhA、rpsl和embB，耐药突变位点D516V、D516G、H526Y、H526D、S531L、S531W、315M、-15M、43M、88M、306M1、306M2、306M3。按照诊断性试验评价方法，对核酸扩增和反向点杂交技术检测结核杆菌耐药突变基因进行方法学性能评价。数据统计学分析采用SPSS13.0软件。 结果：264例结核病患者中，对4种抗结核药物均敏感的174例，对1种或以上抗结核药物耐药的90例，耐药率为34.09%，其中耐单药率为14.77%，耐多药率为19.32%。141例初治患者中，对4种抗结核药物均敏感的116例，对1种或以上抗结核药物耐药的有25例，耐药率为17.73%，其中耐单药率为12.77%，耐多药率为4.96%。123例复治患者中，对4种抗结核药物均敏感的有58例，对1种或以上抗结核药物耐药的65例，耐药率为52.85%，其中耐单药率为14.77%，耐多药率35.77%。复治患者与初治患者之间耐药率差异具有统计学意义，耐多药率差异也具有统计学意义。若不考虑耐多药情况，只考虑每种药耐药及耐药突变位点，则异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇的耐药率分别为22.73%、20.45%、15.91%和6.82%。异烟肼常见突变位点为315M；利福平最常见突变位点为S531L，其次为H526Y；链霉素最常见突变位点为43M；乙胺丁醇最常见突变位点是306M2。以DNA测序法为金标准，核酸扩增和反向点杂交技术检测结核杆菌耐药突变基因的敏感度为94.74%、特异度100%、准确度为98.11%、阳性预测值为100%、阴性预测值为97.13%、阳性似然比为∞、阴性似然比为0.0526。两种方法检测结果经χ2检验，差异无统计学意义。 结论： 1、深圳地区结核病患者对四种常见抗结核药物的耐药率达34.09%，复治患者耐药率比初治患者高2倍，且耐多药率达19.32%，复治患者耐多药率比初治患者高6倍，对异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇等的耐药率依次递减，最常见的耐药基因突变位点分别为315M、S531L、H526Y、43M和306M2。 2、深圳地区与其它地区结核杆菌单耐药率及耐药顺位存在差异。 3、核酸扩增和反向点杂交技术检测结核杆菌耐药突变基因的敏感度、特异度和准确度均能满足临床要求，且操作简便，结果快速，适合临床实验室使用。