自酸蚀树脂粘接剂中原位合成纳米银对口腔菌斑生物膜的抗菌性研究

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【目的】本研究的目的是运用纳米银原位合成法对临床上常用的二步法和一步法自酸蚀树脂粘接接剂进行抗菌改性,通过透射电镜检测纳米银颗粒的生成与分布情况,以及在体外建立口腔菌斑生物膜模型以评估其抗菌性能,为纳米银在两种类型自酸蚀树脂粘接剂中的应用提供理论基础。【方法】将0.08g 2-乙基己酸银添加到0.92g甲基丙烯酸叔丁基氨基乙酯(TBAEMA)中,震荡混匀后制成质量分数为8%的银源溶液,再将该银源溶液分别以0%、0.1%、0.2%质量分数添加到二步法自酸蚀树脂粘接剂Clearfil SE Bond(CSB)的bond部分及一步法自酸蚀树脂粘接剂Clearfil SE One(CSO)中,混合均匀后将粘接剂灌入特制的树脂模具中,经光固化灯双面分别照射20s后制成直径6mm,厚1mm的圆盘状树脂试件。用打孔器制作内径6mm,厚1mm的透明聚酯薄膜作为空白对照组。以0%Ag组为阴性对照组,以0.1%Ag、0.2%Ag组为含银实验组。采用透射电镜观察固化后的树脂粘接剂试件中纳米银的生成,并检测所生成纳米银的形貌、粒径及分散情况;将固化后的试件在无菌水中浸泡1周,经干燥消毒处理后,建立口腔菌斑生物膜体外模型,将树脂粘接剂试件与人唾液共培养48h,采用扫描电镜观察试件表面所生成菌斑生物膜的形态,并采用活/死菌染色,口腔菌斑生物膜全菌落计数(CFU)来评价其对口腔菌斑生物膜的抗菌情况。【结果】透射电镜观察结果显示含银实验组试件中有分散均匀的纳米银颗粒生成,纳米银颗粒呈黑色圆点状。0.1%Ag CSB组、0.2%Ag CSB组、0.1%Ag CSO组、0.2%Ag CSO组的纳米银颗粒平均粒径分别为(10.82±3.66)nm、(8.84±3.21)nm、(21.38±5.39)nm、(17.77±4.72)nm。口腔菌斑生物膜菌落计数换算得到的抗菌率结果显示:0%Ag CSB组的为15%,0.1%Ag CSB组的为57%,0.2%Ag CSB组的为77%,0%Ag CSO组的为32%,0.1%Ag CSO组的为64%,0.2%Ag CSO组的为84%;与0%Ag组相比,0.1%Ag、0.2%Ag组树脂试件的抗菌性显著增强(P<0.05),0.2%Ag组抗菌率大于75%。扫描电镜结果显示6组试件表面均有细菌覆盖,0%Ag组试件表面细菌覆盖密度较大,而0.1%Ag、0.2%Ag组试件表面细菌分布相对稀疏,0.2%Ag组试件表面细菌附集相对更少。活/死菌染色结果显示0%Ag CSB组表面覆盖大量活细菌;0%Ag CSO组表面有部分活菌覆盖的同时也有部分死菌覆盖;0.1%Ag,0.2%Ag组试件表面的菌斑生物膜主要为死菌覆盖。【结论】在两种类型自酸蚀树脂粘接剂中运用原位合成法可生成分布均匀的纳米银颗粒,但其粒径受到酸性影响。含不同粒径纳米银的一步法和二步法自酸蚀型树脂粘接剂对口腔菌斑生物膜均具有显著抗菌性能,并且抗菌活性随着银盐浓度的增加而加强。
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