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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种常见的革兰阴性条件致病菌,能够引起免疫力低下患者的慢性感染,感染易反复发作且难以清除。PA不仅可以形成生物膜、分泌多种毒力因子,并对多种常见抗生素耐药,使感染难以控制,难以根治。目前PA感染治疗药物的研究主要是抗生素类药物,而基于其它机制的药物研究却很少报道。近年来的研究发现,PA生物膜的形成和维持以及毒力因子的合成释放主要由密度感应系统即群感效应(quorum sensing,QS)调控。伞形花内酯是香豆素类化合物,具有良好的抗菌、降压和抗癌作用。研究表明,伞形花内酯对PA具有明显的抑制作用,但其作用机制尚未明确。本论文研究分析了伞形花内酯对PA的毒力因子以及生物膜形成的影响,初步探讨了伞形花内酯抑制PA生物被膜形成以及致病能力的作用及其机制。目的:研究伞形花内酯对PAO1生物膜、毒力因子形成以及耐药性的影响,探究伞形花内酯抑制PA密度感应系统的机制。方法:利用构建好的筛选体系,紫色杆菌CVO26平板显色反应,初步筛选出具有抑制群感效应作用的药物。测定不同浓度伞形花内酯处理后,PA泳动能力以及毒力因子产生量的变化;qPCR检测PA群感效应相关基因的表达变化;电子显微镜检测不同浓度伞形花内酯处理后,PA生物膜的显微变化;结晶紫半定量法测定生物膜形成量;分子模拟对接试验模拟受体蛋白与伞形花内酯结合状态;体外模拟诱导耐药条件,观察伞形花内酯影响PAO1的耐药性情况。结果:浓度20、40、80μg/ml的伞形花内酯处理使PAO1的LasA蛋白酶活性分别下降30.3、41.8、69.8%,LasB蛋白酶活性分别下降31.3、34.4、39.3%,绿脓菌素产生量分别降低14.9、16.19、18.4%,鼠李糖脂产生量分别降低28.5、54.2、62.8%,生物膜形成量分别减少了25.3、34.6、43.8%,细胞表面疏水性(CSH)分别下降4.0、10.4、23.5%,胞外DNA(eDNA)分别下降24.7、40.8、48.3%。qPCR实验显示伞形花内酯降低了基因lasI(34.8-86.8%)、lasR(39.3-85.4%)、rhlI(45.3-85.6%)和rhlR(48.2-86.8%)的表达。通过分子对接发现伞形花内酯可以与QS受体蛋白(LasI,LasR,RhlR)紧密结合,同时证实其能够有效延缓PAO1耐药的发生。结论:伞形花内酯具有群感效应抑制作用,能抑制PAO1毒力因子的合成且影响生物被膜的形成和分散,能与群感效应相关受体蛋白紧密结合,同时具有延缓或抑制PAO1耐药的作用。