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目的：通过体外细胞培养和建立荷瘤小鼠模型及肺转移模型，观察蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖和转移的影响，研究其抗肿瘤及抗转移的生物活性，并探讨其抗肿瘤和抗转移的可能作用机制，为阐明蜂毒素抗肿瘤作用提供部分实验依据。方法：1．蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖与荷瘤小鼠及生存期的影响：H22细胞体外常规培养，以每孔5×104个细胞接种于96孔板中，加入不同剂量的蜂毒素，终浓度2-128μg/ml，分别作用24、48小时，酶联仪检测各孔的吸光度，计算蜂毒素对H22细胞的杀伤率。H22细胞经蜂毒素（2μg/ml，6μg/ml）作用24、48小时后，免疫荧光间接标记法染色，运用流式细胞术分析增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。选用雄性昆明种小白鼠120只，体重20±2g，皮下接种H22细胞（2×106/只），24小时后随机分为5组，尾静脉注射高（4.5mg/kg/d）、中（3mg/kg/d）、低（1.5mg/kg/d）剂量蜂毒素治疗组，环磷酰胺（30 mg/kg/d）阳性对照组、生理盐水阴性对照组，同一时间尾静脉注射，连续给药5天，休息2天，再继续给药5天，治疗10天后，每组各处死小鼠12只，取瘤体称重，计算抑瘤率，余小鼠观察生存期。2．蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞实验性肺转移的影响：选用雄性昆明种小白鼠48只，体重20±2g，经尾静脉注射H22细胞（2×105/只），建立实验性肺转移肿瘤模型，随机分为治疗组和对照组，每组24只，24小时后分别尾静脉注射蜂毒素（1.5 mg/kg/d）和等量生理盐水，同一时间尾静脉注射，连续给药5天，休息2天，再继续给药5天，给药10天后，每组各处死小鼠12只，观察肿瘤转移情况，其余小鼠观察生存期。H22细胞经蜂毒素（2μg/ml，6μg/ml）作用24、<WP=5>48小时后，运用流式细胞术分析细胞间粘附分子（ICAM-1）的表达。采用RT-PCR方法检测ICAM-1mRNA的表达。结果：1．蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖与荷瘤小鼠及生存期的影响：蜂毒素作用24h、48h，≤4μg/ml蜂毒素组对H22细胞的抑制率均在30%左右，而≥8μg/ml蜂毒素组对H22细胞的抑制率均在70%以上，作用明显增强；且随药物浓度增高而增强；各剂量组24h、48h两个时间点对H22细胞的抑制率无统计学差异（p>0.05）。蜂毒素2μg/ml、6μg/ml作用H22细胞24h、48h后，PCNA平均荧光强度均低于对照组（p<0.01），提示蜂毒素对PCNA的表达有明显的抑制作用。蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞皮下接种肿瘤具有明显的抑制作用，随浓度增加，其抑瘤作用逐渐增强，高、中剂量蜂毒素组、环磷酰胺组平均瘤重明显低于对照组（p<0.01），低剂量蜂毒素组与对照组平均瘤重无统计学差异（p>0.05），蜂毒素高剂量组平均瘤重明显低于中剂量组（p<0.01）；各实验组生存期均长于对照组（p<0.01），高剂量蜂毒素组与环磷酰胺组平均生存期无统计学差异（p>0.05），中、低剂量组生存期均明显低于环磷酰胺组（p<0.01）。2．蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞实验性肺转移的影响：H22细胞尾静脉注射后第14天，处死的24只小鼠全部发生肺转移，转移程度分级表明，蜂毒素组小鼠Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级转移率分别为7/12、4/12、1/12，对照组小鼠Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级转移分别为2/12、6/12、4/12，蜂毒素组平均生存期30.25±2.35天，对照组20.18±1.89天；蜂毒素组与对照组相比，Ⅰ级转移率均明显升高（p <0.05），Ⅱ、Ⅲ级转移率无统计学差异（p>0.05），总体转移程度明显减轻（p<0.05），生存期明显延长（p<0.05）。2μg/ml、6μg/ml蜂毒素作用于H22细胞24h、48h后，流式细胞仪检测细胞膜表面ICAM-Ⅰ的阳性率，24小时阳性率分别为46.6%、19.38%，对照组为92.11%， 48小时阳性率分别为13.5%、7.45%，对照组为91.13%；两时间点治疗组阳性率均明显低于对照组（p<0.01），6μg/ml蜂毒素组阳性率均明显低<WP=6>于2μg/ml组（p<0.01）；两剂量组48小时阳性率均明显低于24小时阳性率（p<0.01），说明蜂毒素可降低H22细胞膜表面ICAM-Ⅰ的表达，且有时间与剂量依赖性。H22细胞经蜂毒素作用48h，RT-PCR 检测ICAM-1mRNA的表达，电泳后进行紫外光扫描分析，与内参β-actin相比，2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml剂量蜂毒素组紫外光灰度比值分别为2.3， 2.0， 0.75，而对照组为4.29，实验结果提示蜂毒素能够降低H22细胞ICAM-1mRNA的表达。结论：1．蜂毒素对体外生长的小鼠肝癌H22细胞及皮下种植瘤均有明显的生长抑制作用，能延长荷瘤小鼠的生存期；下调细胞PCNA的表达可能是蜂毒素抗肿瘤细胞增殖的机制之一。2．蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞实验性肺转移具有明显抑制作用，能降低小鼠肺转移程度，延长肺转移小鼠生存期；蜂毒素抑制小鼠肝癌H22细胞实验性肺转移的作用机制可能与其下调H22细胞ICAM-1mRNA和蛋白表达有关。