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目的:大肠癌是严重威胁人类生命健康的常见恶性肿瘤之一,目前主要采用手术、放疗、化疗相结合的治疗方法,虽然治疗手段较前有了较大进步,但疗效并不乐观。鉴于恶性肿瘤的发生发展与机体的免疫功能低下有关,免疫治疗越来越受到重视。免疫平衡(Th1/Th2平衡)理论的提出,为恶性肿瘤的免疫研究提供了一个有力的工具。研究发现恶性肿瘤患者普遍存在免疫力下降,Th1/Th2平衡向Th2型偏移。目前认为,纠正Th1/Th2失衡对机体是保护性的。本课题旨在通过流式细胞学和ELISA方法测定、观察大肠癌患者和接种Colon26细胞小鼠的Th1/Th2平衡偏移情况。同时以转染IL-21基因的Colon26细胞(Colon26/IL-21)建立小鼠模型,以期其持续分泌IL-21,通过IL-21影响机体的Th1/Th2平衡,观察调节Th1/Th2平衡对大肠癌的影响。方法:第一部分:随机选取于河北医科大学第四医院外科手术的大肠癌患者30例为实验组,术前经病理证实,30例正常人为对照组,术前空腹静脉采血。①采血(EDTA-K2抗凝)后立即进行实验,先用PMA作刺激原对T细胞进行活化,然后用流式细胞学方法,检测CD4+IFN-γ+ T细胞(Th1细胞)、CD4+IL-4+ T细胞(Th2细胞)占CD4+T细胞的百分数,再以二者相除得出Th1/Th2细胞比值。②采血后离心用ELISA法测定血清IFN-γ和IL-4浓度,并计算IFN-γ/IL-4比值。用两样本t检验的方法比较实验组和对照组Th1细胞、Th2细胞数量、Th1/ Th2细胞比值及IFN-γ、IL-4浓度、IFN-γ/IL-4比值有无差别。第二部分:取90只同龄Balb/c小鼠,随机分为3组。第一组用小鼠结肠低分化腺癌Colon26细胞接种于爪垫内侧皮下;第二组用转染IL-21基因的Colon26/IL-21细胞接种于小鼠爪垫内侧皮下;第三组以同体积生理盐水注射于小鼠爪垫内侧皮下。观察小鼠肿瘤生长情况。于接种后24日摘眼球取血,离心,用ELISA法测血清IFN-γ和IL-4浓度,并二者相除得出IFN-γ/IL-4比值。采用完全随机的单因素方差分析,比较三组之间血清IFN-γ、IL-4浓度和IFN-γ/IL-4比值有无差别。同时测定接种Colon26细胞小鼠和接种Colon26/IL-21细胞小鼠的肿瘤重量,统计二者有无差别。取小鼠肿瘤组织用HE染色的方法对比观察接种Colon26细胞小鼠和接种Colon26/IL-21细胞小鼠肿瘤的组织、细胞学变化。结果:1 30例大肠癌患者和30例正常人Th1细胞的测定值分别为11.78±5.04%和11.39±3.62%,两样本t检验P>0.05,无统计学差异;Th2细胞的测定值分别为16.4±7.02%和10.63±4.55%,P<0.01,有统计学差异;Th1/ Th2比值分别为0.74±0.27和1.26±0.9,P<0.05,有统计学差异。血清IFN-γ浓度的测定值分别为6.26±1.43pg/ml和9.18±2.31 pg/ml,两样本t检验P<0.05,有统计学差异;IL-4浓度的测定值分别为8.88±1.30pg/ml和5.20±1.71pg/ml,P<0.01,有统计学差异;IFN-γ/IL-4比值的测定值分别为0.70±0.10和1.82±0.35,P<0.01有统计学差异。2①接种Colon26细胞组小鼠肿瘤持续增大,接种Colon26/IL-21细胞组小鼠肿瘤于16天达到平均体积1.3mm3,然后逐渐缩小。24天时处死小鼠后两组肿瘤称重结果,接种Colon26细胞组小鼠肿瘤平均重量2.48±0.31g,接种Colon26/IL-21细胞组小鼠肿瘤平均重量0.27±0.10 g,P<0.01,有统计学意义。②接种后24天时肿瘤HE染色证实接种Colon26细胞组小鼠和接种Colon26/IL-21细胞组小鼠爪垫组织均为恶性肿瘤组织。对比观察,接种Colon26/IL-21细胞组小鼠肿瘤组织有萎缩、消退的表现。③血清IFN-γ、IL-4浓度测定结果:IFN-γ浓度接种Colon26/IL-21细胞小鼠、接种Colon26细胞小鼠及正常小鼠的测定值分别为44.80±8.07pg/ml、26.40±2.31pg/ml和31.21±3.36pg/ml,统计表明三者之间两两比较均有差别。IL-4浓度接种Colon26/IL-21细胞小鼠、接种Colon26细胞小鼠及正常小鼠的测定值分别为134.61±16.41pg/ml、170.42±19.77pg/ml和120.60±16.38pg/ml,统计表明接种Colon26/IL-21细胞小鼠与接种Colon26细胞小鼠之间有差别,P<0.01;接种Colon26细胞小鼠与正常小鼠之间有差别,P<0.01;接种Colon26/IL-21细胞小鼠与正常小鼠之间无统计学差别,P>0.05。IFN-γ/IL-4比值接种Colon26/IL-21细胞小鼠、接种Colon26细胞小鼠及正常小鼠的测定值分别为0.33±0.06、0.16±0.01和0.26±0.03,统计表明三者之间两两比较均有统计学差别。结论:1大肠癌患者与正常人相比细胞免疫功能下降,免疫平衡(Th1/Th2平衡)向Th2型偏移。2 IL-21可以增强Th1型细胞免疫功能,调节Th1/Th2细胞比例,纠正免疫失衡。3改善肿瘤个体的Th1/Th2平衡状态,可有效发挥杀灭肿瘤的作用。4调节肿瘤患者的免疫平衡状态有望成为大肠癌免疫治疗手段。