依托咪酯对脊髓腹角神经元中GABA电流和甘氨酸电流作用的比较分析

来源 :皖南医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jingcang_wu
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目的:研究依托咪酯对新生大鼠脊髓腹角神经元上γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)电流和甘氨酸(glycine,Gly)电流的作用,并进行比较分析。方法:选取7~12日龄的新生SD大鼠进行实验,使用乙醚混合冰浴麻醉后,分离出含有腰骶膨大部分的脊髓节段,清除残留的神经根后,使用震荡切片机制备3~5片厚度为400~500μm的脊髓腰骶膨大部分的切片。将脊髓切片置于33℃的木瓜蛋白酶溶液(Papain,0.18 g/30 m L人工脑脊液)中,消化切片大约20 min,再将切片移入室温的人工脑脊液中缓冲40~60 min。使用手术刀片经中央孔分离出脊髓切片的腹侧部分,分别放入直径35 mm培养皿中,并使用不同口径的巴斯德吸管对切片进行吹打,得到游离的单个细胞。吹打完成后静置约20 min,待细胞贴壁后,移动培养皿至显微镜下,选取贴壁的状态良好的神经元进行穿孔膜片钳记录。结果:(1)使用脊髓急性分离方法得到的神经元状态良好,胞体透亮,突起完整。(2)脊髓腹角神经元的自发放电连续且稳定,几乎都有超射,表明细胞状态良好。(3)单独给予3.0μmol/L的ET无法在脊髓腹角神经元上诱发电流,而3.0μmol/L的ET预处理2 min后,GABA峰电流增大并稳定至对照电流的147.67±25.26%,稳态电流增大并稳定至对照电流的171.26±23.27%(n=5,P<0.01)。(4)使用3.0μmol/L的ET预处理2 min,Gly(30.0μmol/L)峰电流幅度增大并稳定至对照电流的128.37±6.93%,稳态电流增大并稳定至对照电流的119.41±4.82%(n=4,P<0.01)。(5)使用3.0μmol/L的ET预处理2 min后,使GABA电流的上升时间减小至对照电流的58.35±6.10%(n=5,P<0.01),而衰减时间增大至对照电流的162.26±14.58%(n=5,P<0.01)。(6)使用3.0μmol/L的ET预处理2 min后,使得Gly电流的上升时间减小至对照电流的72.53±6.19%(n=5,P<0.01),而衰减时间则增大至对照电流的113.68±7.47%(n=5,P<0.01)。(7)不同浓度的ET对脊髓腹角神经元上GABA峰电流的作用具有差异性,1.0μmol/L、3.0μmol/L、10.0μmol/L的ET分别将GABA峰电流增大至对照电流的141.02±11.30%(n=4,P<0.01),147.67±25.26%(n=5,P<0.01),112.16±5.67%(n=4,P<0.01),而30.0μmol/L的ET将GABA峰电流减小至对照电流的68.72±7.92%(n=6,P<0.01)。(8)不同浓度的ET对脊髓腹角神经元上Gly峰电流的作用具有差异性,1.0μmol/L、3.0μmol/L的ET分别将Gly峰电流增大至对照电流的115.44±5.89%(n=4,P<0.01),130.37±10.98%(n=5,P<0.01),而10.0μmol/L和30.0μmol/L的ET将Gly峰电流分别减小至对照电流的84.90±5.30%(n=4,P<0.01)和62.82±8.69%(n=4,P<0.01)。结论:(1)使用酶消化结合急性机械分离方法得到的脊髓腹角神经元胞体透亮,突起完整,细胞状态良好,适用于进行穿孔膜片钳记录。(2)临床浓度ET对脊髓腹角神经元上GABA受体和Gly受体介导的峰电流和稳态电流的幅度具有不同程度的增大作用。(3)临床浓度ET差异性的缩短脊髓腹角神经元GABA和Gly受体介导电流的上升时间,延长其衰减时间。(4)ET对脊髓腹角神经元上GABA电流和Gly电流幅度的作用具有浓度相关性。
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