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目的本论文研究草果乙醇提取物模拟消化前后对体外糖脂代谢关键酶的抑制作用和其含有的生物活性成分,并通过建立高糖高脂联合链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）诱导的2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）大鼠模型探究草果乙醇提取物对T2DM大鼠肾脏结构和功能损伤的保护作用,为T2DM肾脏并发症的防治及草果的进一步开发利用提供科学依据。方法选取糖脂代谢关键酶α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶和乙酰胆碱酯酶,进行草果乙醇提取物的体外酶抑制实验,评估草果乙醇提取物的降糖降脂作用。基于COST Action INFOGEST框架,采用静态体外消化方法,进行草果乙醇提取物经口腔,胃和肠道消化不同时间的模拟,并对模拟消化后草果乙醇提取物的糖脂代谢关键酶抑制活性进行评价。利用HPLC技术对草果乙醇提取物中的生物活性成分进行分析,采用改进的Dowd方法测定其中的总黄酮含量,并利用UPLC-MS/MS技术对其中的黄酮类化合物进行进一步的分析鉴定。将获得的黄酮类化合物的保留时间、质荷比、碎片离子峰、分子式等信息,与相应数据库（Plant MAT、Bio Deep DB和KEGG）进行匹配,得到黄酮类化合物的成分信息。适应性饲养1周的42只6周龄SD雄性大鼠,被随机分成正常对照组（n=8）和高糖高脂组（n=34）。两组分别给予普通饲料和高糖高脂饲料,继续饲养4周后,高糖高脂组腹腔注射STZ诱导T2DM大鼠模型,正常对照组腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液。随后将诱导成功的T2DM大鼠随机分成T2DM模型组、草果组（100 mg/kg）、二甲双胍组（100 mg/kg）,进行为期6周的干预实验。实验期间记录大鼠一般状况,干预后测定大鼠的体重和肾脏脏器系数;对肾脏组织形态学改变进行HE染色、油红O染色、PAS染色和Masson染色观察;对肾功能指标血清胱抑素C（Cystatin C,CYS-C）、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（β-N-acetylglucosaminidase,NAG）、肌酐（Serum creatinine,SCR）、尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）,血清脂肪因子脂联素（Adiponectin,ADP）、瘦素（Leptin,LEP）,血清和肾组织炎症指标肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）和白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）,血清还原型谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSHPx）和肾组织超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）等氧化应激指标进行测定,并利用免疫组织化学技术对肾组织中反映肾功能和肾纤维化的相关蛋白Nephrin、TGF-β1和MMP-9的表达进行分析。结果1.草果乙醇提取物对糖代谢相关的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有强抑制作用,其IC50分别为33.85 mg/m L和3.64 mg/m L,对脂代谢相关的胰脂肪酶和乙酰胆碱酯酶也显示出一定的抑制作用,其IC50分别为118.05 mg/m L和110.27mg/m L。模拟消化后,草果乙醇提取物对α-淀粉酶和胰脂肪酶的抑制作用减弱,对乙酰胆碱酯酶的抑制作用增强,对α-葡萄糖苷酶的抑制作用未发生较大改变。模拟消化时间会影响草果乙醇提取物的酶抑制功能,对经肠消化后草果乙醇提取物的乙酰胆碱酯酶抑制功能的影响最小。2.通过HPLC方法从草果乙醇提取物中分析得出了10种活性成分,其中3种为酚酸类,6种为黄酮类,1种为二苯基庚烷类。草果乙醇提取物中总黄酮含量为0.73 mg QE/g DW,利用UPLC-MS/MS技术进一步从中鉴定出了25种黄酮类成分,其中相对丰度较高的主要有2"-O-没食子酰基金丝桃苷、日当药黄素、槲皮素-7-O-鼠李糖苷、（+）-儿茶素、槲皮素、Epsilon-白藜芦醇脱氢二聚体和原花青素B1。3.T2DM大鼠体重及肾脏脏器系数的变化:干预6周后,T2DM模型组大鼠的体重低于正常对照组,但肾脏脏器系数高于正常对照组（P＜0.05）;草果组大鼠的体重高于T2DM模型组,但差异无统计学意义（P＞0.05）,其肾脏脏器系数低于T2DM模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.T2DM大鼠肾脏组织病理学的改变:HE染色、油红O染色、PAS染色和Masson染色结果显示,与正常对照组相比,T2DM模型组大鼠肾小球形态异常,基底膜增厚,系膜区增宽,胞浆空泡化、肾组织中脂质、糖原和胶原纤维沉积明显增多。与T2DM模型组相比,草果组大鼠肾小球形态正常,系膜区稍许增宽,肾组织中脂质、糖原和胶原纤维沉积减少。5.T2DM大鼠血清肾功能指标、血清脂肪因子的变化:干预后,T2DM模型组大鼠血清CYS-C、NAG、SCR和BUN的含量均高于正常对照组（P＜0.05）;草果组和二甲双胍组大鼠血清CYS-C、NAG、SCR和BUN的含量均低于T2DM模型组（P＜0.05）。此外,T2DM模型组大鼠血清ADP的含量低于正常对照组（P＜0.05）,草果组和二甲双胍组大鼠血清ADP的含量高于T2DM模型组（P＜0.05）。各组大鼠血清LEP含量之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。6.T2DM大鼠血清和肾组织中炎症因子、氧化应激指标的变化:干预后,T2DM模型组大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量均高于正常对照组（P＜0.05）,草果组大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量均低于T2DM模型组（P＜0.05）。此外,T2DM模型组大鼠血清GSH和GSH-Px的含量均低于正常对照组（P＜0.05）,草果组和二甲双胍组大鼠血清GSH和GSH-Px的含量均高于T2DM模型组（P＜0.05）。T2DM模型组大鼠肾组织中SOD的含量低于正常对照组、MDA的含量高于正常对照组（P＜0.05）,草果组和二甲双胍组大鼠肾组织中SOD的含量高于T2DM模型组、MDA的含量低于T2DM模型组（P＜0.05）。7.T2DM大鼠肾功能及纤维化相关蛋白的表达情况:T2DM模型组大鼠肾组织中Nephrin和MMP-9蛋白的阳性着色浅淡稀疏,蛋白表达量均低于正常对照组（P＜0.05）。草果组和二甲双胍组大鼠肾组织中Nephrin和MMP-9蛋白的阳性着色深于T2DM模型组,表达量均高于T2DM模型组（P＜0.05）。另外,T2DM模型组大鼠肾组织中TGF-β1蛋白的棕黄色着色区域较多,蛋白表达量高于正常对照组（P＜0.05）。草果组大鼠肾组织中TGF-β1蛋白的阳性着色区域较T2DM模型组大鼠少且浅,蛋白表达量低于T2DM模型组（P＜0.05）。结论1.草果乙醇提取物模拟消化前后均具有较强的体外α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性,提示草果具有良好且稳定的降糖降脂作用。草果乙醇提取物中含有酚酸、黄酮和二苯基庚烷类化合物,其中黄酮类化合物成分丰富,可进行更深入的研发和利用。2.草果乙醇提取物能够缓解T2DM大鼠体重减轻和肾脏肥大的症状,改善肾脏肾小球和肾小管组织形态、脂质和糖原沉积以及组织纤维化状况,减轻T2DM大鼠肾脏组织结构的损伤。3.草果乙醇提取物能够改善T2DM大鼠肾脏滤过功能的损伤,缓解肾组织炎症,提高肾组织抗氧化水平,调节与肾功能和纤维化相关的蛋白表达,对T2DM大鼠肾功能损伤具有保护作用。