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Ca2+是植物生长发育和应答多种逆境胁迫响应的重要调控因子,在植物抗病以及适应复杂的非生物胁迫反应过程中均起着十分重要的作用。当植物遭受外界逆境刺激时,胞内Ca2+会产生时空上的变化,被胞内钙离子感受器感知与解码,并通过互作蛋白将信号传递至下游,最终引起植物的特异性抗逆反应。钙调磷酸酶B类蛋白(Calcineurin B-like protein,CBL)家族是一类钙离子结合蛋白,需与蛋白激酶CIPK(CBL-interacting proteinkinase)互作进行解码传递“Ca2+信号”。目前有关CBL-CIPK网络信号系统在拟南芥植物中的研究较为透彻,然而有关番茄CBL-CIPK信号途径的功能知之甚少。因此,研究开展番茄57CBLs的功能研究对于丰富CBLs-CIPKs所介导的抗逆分子机制具有一定的意义。本文在实验室前期已经获得了番茄SlCBL2的超表达和RNAi(RNA interference)转基因本氏烟(Nicotiana benthamiana)的基础上,对番茄SlCBL2的功能进行了鉴定,主要研究结果如下:1、通过对SlCBL2的超表达和RNAi转基因本氏烟在三个不同阶段(萌发阶段、幼苗阶段、成苗阶段)下进行高盐、低钾、高pH、氧化胁迫处理,发现在萌发阶段,尽管高盐、低钾、氧化胁迫下对种子萌发率影响较大,但转基因株系与野生型之间并无明显差异;虽然高pH胁迫对萌发率的影响较小,但超表达株系比野生型生长更好;幼苗阶段,转基因株系与野生型在高盐、低钾胁迫处理下无明显差异,而在氧化、高pH胁迫下超表达株系表现出更高的耐受性;成苗阶段,高盐、低钾、氧化胁迫均对本氏烟生长造成了一定的影响,但转基因株系与野生型之间未表现出明显差异;而在高pH胁迫处理下,超表达株系表现出更高的抗高pH能力,对光系统Ⅱ最大光化学量子产量(Fv/Fm)测定发现,超表达株系Fv/Fm参数下降的幅度比野生型小。2、本实验室前期针对BiFC载体进行了部分的改造,但改造后的载体在研究蛋白互作的过程时假阳性率相对较高。因此,为了克服先前BiFC载体缺点,我们以pCAMBIA1301为骨架再次进行了改造,改造后的新BiFC载体能够同时插入靶基因及自身启动子。在分别克隆得到番茄SlCBL2及其启动子后,插入新改造载体,构建成功pCAMBIA1301-pSlCBL2-nEYFP-SlCBL2,利用该载体研究了番茄 SlCBL2 与 SlCIPKs(SlCIPK3、SlCIPK7、SlCIPK8、SlCIPK9、SlCIPK11、SlCIPK23、SlCIPK24)的互作情况。结果发现SlCBL2仅与SlCIPK8互作;而利用本室前期构建的35S-nEYFP-S1CBL2载体作为对照时,发现SlCBL2与SlCIPK3、SlCIPK8、SlCIPK11、SlCIPK23均发生互作,表明新改造的载体可有效降低假阳性。此外,与AtCBL2互作AtCIPK11不同,S1CBL2与SlCIPK8互作,而不是SlCIPK11。3、为了进一步明确SlCBL2调控高pH胁迫的可能原因,我们利用实时荧光定量PCR检测了下游相关基因的表达,在SlCBL2背景下,NbNHX2与NbAHA2呈组成性激活表达;NbDREB2与NbVHA1表达与SlCBL2及高pH胁迫无相关性。