目的:Hippo通路对控制组织器官大小发育以及细胞增殖、凋亡和肿瘤的形成起着重要的作用。而VGLL4（Vestigial-like family member 4）是近期研究发现的可与Hippo通路下游的转录因子TEAD相互作用的蛋白,在多种肿瘤中已被证实作为肿瘤抑制因子发挥着作用,其下游基因NEDD9（Neural precursor cell expressed,developmentally down-regμlated 9）在促进乳腺肿瘤进展、转移方面担当着重要的角色。三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）因高度恶性、易早期远处转移、缺乏有效的治疗手段,是乳腺癌预后最差的亚型,本课题通过探讨VGLL4与NEDD9之间的调控关系,阐明它们在三阴性乳腺癌中的功能和作用,以期寻找到新的分子靶点和治疗策略。方法:通过对人乳腺癌组织芯片进行免疫组化（IHC）分析,明确VGLL4的表达水平以及临床相关性。再选取人乳腺癌细胞系结合分子生物学、细胞生物学、病理学等手段,利用细胞生长曲线（MTT assay）、软琼脂克隆形成实验（Soft Agar）及裸鼠模型等实验,研究VGLL4对乳腺癌细胞增殖的影响。通过基因芯片分析及文献计量学分析找到调控显著的基因NEDD9,并通过Western Blot及实时定量PCR等实验方法探究其与Hippo通路的重要因子VGLL4的调控关系。结果:对人乳腺癌组织芯片进行免疫组织化学研究（芯片包括534例人乳腺癌组织和121例人乳腺癌旁组织）,结果显示乳腺癌组织中VGLL4蛋白质表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.01）。进一步分析这些乳腺癌标本的临床相关性,发现VGLL4表达水平与肿瘤的大小、雌激素受体表达水平以及孕激素受体表达水平显著相关。并且VGLL4的表达水平在TNBC组中显著降低,提示VGLL4表达水平高是预后良好的标志。选取MDA-MB-231和MDA-MB-453人乳腺癌细胞系进行功能实验,在细胞生长曲线MTT实验和软琼脂集落形成实验中,过表达VGLL4的实验组细胞增长及集落形成受到明显抑制。裸鼠成瘤实验结果显示过表达VGLL4能显著抑制肿瘤细胞在体内的增殖（P＜0.05）。细胞周期相关实验分析表明过表达VGLL4能显著抑制细胞周期。为了提供更可靠的科学依据,对过表达VGLL4的细胞株进行基因芯片分析,结果显示过表达VGLL4后多个基因表达水平发生显著变化,其中Cas的家庭成员NEDD9是显著变化的基因之一。在人乳腺癌样本芯片中对NEDD9进行分析,结果发现乳腺癌组织中NEDD9的表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.01）,进一步分析临床相关性,数据表明NEDD9的表达水平与肿瘤的大小、淋巴结转移数量、PR表达水平、HER2表达水平密切相关。过表达VGLL4不仅能显著抑制肿瘤细胞增殖,而且使另一促进增殖和转移的重要基因NEDD9显著下调。结论:本论文针对Hippo通路的新成员VGLL4在乳腺癌发生发展过程中的作用展开了系统性的研究,通过对人乳腺癌临床样本、乳腺癌细胞系和裸鼠成瘤模型的整合性研究,我们发现首先VGLL4在乳腺癌组织的表达水平显著低于癌旁,尤其是在三阴性乳腺癌中,并且VGLL4表达水平与肿瘤大小、ER表达水平、PR表达水平及患者的总生存期等密切相关,提示VGLL4表达水平高是预后良好的标志。NEDD9表达水平与乳腺肿瘤的大小、淋巴结转移数、PR表达水平、HER2表达水平密切相关,提示NEDD9高表达是预后欠佳的标志。过表达VGLL4不仅能显著抑制肿瘤细胞增殖,而且使另一促进增殖和转移的重要基因NEDD9显著下调,阐明其在乳腺癌中发挥抑癌基因的作用,这些工作为乳腺癌的临床治疗提供了潜在的分子靶点和治疗策略。