间充质干细胞(MSCs)用于肿瘤化疗辅助治疗及与肿瘤生长关系的实验研究

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间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有多项分化潜能的成体干细胞,在细胞治疗和再生医学领域具有巨大的应用潜力。但是,MSCs在肿瘤化疗领域的应用潜力至今尚不清楚,本文拟研究MSCs作为肿瘤化疗的辅助治疗手段,缓解化疗导致的组织损伤,并研究影响MSCs与肿瘤生长的因素。我们分别通过组织块种植法、胶原酶消化法、梯度密度离心法从脐带、脂肪、骨髓中分离出MSCs,流式检测显示三种MSCs均表达CD29,CD44,CD73,HLA-ABC;不表达CD14,CD31,CD34,CD45,HLA-DR。在合适的诱导培养基诱导下,三种MSCs均可以分化为成骨细胞和脂肪细胞。我们开发了一种以海藻糖为核心成分的MSCs4℃保护液。我们发现40mmol/L海藻糖组具有最佳的保护效果,MSCs在保存7天后,台盼蓝检测显示有92.7±1.5%存活,在保存3周后仍有70%的存活率。MSCs在保存3周后与保存前相比具有相同的免疫表型,增殖与分化能力。我们以小鼠Lewis肺癌和人结肠癌两种荷瘤动物模型为研究对象,采用连续三天给予化疗药阿霉素(Adriamycin,ADM)接着尾静脉注射MSCs的治疗方法,结果显示MSCs可以缓解ADM导致的骨髓抑制、心肌损伤,减轻ADM引发的小肠绒毛细胞凋亡,减少体重下降程度,提高致死剂量ADM下小鼠的生存率。同时,尾静脉注射MSCs不影响化疗药对Lewis肺癌和Lovo结肠癌肿瘤的杀伤效果,并且,显著抑制Lewis肺癌的肺转移。我们的结果显示,对于某些类型的肿瘤,MSCs治疗可以作为肿瘤化疗的辅助治疗方法。我们分析了影响MSCs与肿瘤生长的因素,发现脐带MSCs对肺癌细胞如A549,95D等的迁移具有抑制作用,对于乳腺癌细胞如MDA-MB-231,MCF-7等具有促进作用。脐带MSCs抑制低转移肝癌细胞HepG2的迁移,却促进高转移肝癌细胞LM-3和97H的迁移。不同来源的MSCs对于相同肿瘤细胞的作用基本相同。我们通过自然传代和H2O2诱导的方法分别获得了衰老MSCs。与正常MSCs相比,衰老MSCs的分泌型发生显著变化,如IL-6升高了40余倍。衰老MSCs显著促进肿瘤细胞的增殖与迁移且与IL-6的分泌升高密切相关。我们以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象做裸鼠成瘤实验,发现衰老MSCs与肿瘤细胞共移植后,可以显著促进肿瘤的生长,免疫组化分析显示衰老MSCs可以促进肿瘤组织新生血管的生成。
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