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肾细胞癌（Renal cell carcinoma,RCC）是泌尿外科比较常见的一种恶性肿瘤,其发病率仅次于膀胱癌和前列腺癌,位居泌尿系统恶性肿瘤的第三位。近年来,随着影像学技术的发展以及人们对定期体检越来越重视,RCC的发病率呈现逐年增加的趋势。据统计,2021年美国新发RCC患者超过7万例。肾透明细胞癌（Clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）是 RCC 最常见的一种组织学类型,约占所有类型的70%。目前,对于早期或局限性ccRCC病人,在手术治疗之后多可获得长期存活。然而,对于晚期或转移性ccRCC患者,由于对放疗以及化疗不敏感,其预后往往不佳。随着分子生物学技术的不断进步,靶向药物渐渐进入人们的视野中,并且给这类患者的治疗提供了一线希望。尽管如此,许多患者的治疗效果仍然不尽人意。因此,寻找新的、更为有效的治疗ccRCC的靶点是目前亟待解决的关键问题之一。全基因组测序技术为人类的健康做出了巨大的贡献,随着该技术的迅速发展,研究者发现仅有约2%的人类基因最终被翻译为蛋白质,但是,其他大部分的人类基因是不会被翻译成蛋白质的,这部分基因即非编码RNA。长链非编码RNA（Long noncoding RNA,lncRNA）的长度一般超过200nt,且多不具备编码蛋白质的功能。尽管lncRNA不能编码蛋白质,但是却可以通过其他方式影响人体的生物学功能,如基因转录、转录后调控、翻译和翻译后修饰等,这些功能与人类恶性肿瘤的发生以及进展息息相关。研究表明,LINC01116在包括骨肉瘤、胶质瘤、胃癌以及鼻咽癌等的多种恶性肿瘤中异常表达,并且参与调控了这些肿瘤的发生和进展。虽然LINC01116在多种肿瘤中都表现出了重要的作用,然而其在ccRCC中的作用目前尚不清楚。在本研究的前期,我们通过GEPIA数据库分析了 ccRCC组织和正常肾组织中差异表达的lncRNA,发现LINC01116在ccRCC组织中高表达。我们在ccRCC细胞系和ccRCC组织中验证了 LINC01116的表达水平,并且分析了其表达水平与患者临床病理学特征和预后的关系。随后,我们通过核质分离实验验证了LINC01116在ccRCC细胞系中的亚细胞定位。通过一系列的体外实验和体内实验,我们初步研究了 LINC01116对ccRCC细胞生物学功能的影响。为了明确LINC01116调控ccRCC进展的分子生物学机制,我们通过生物信息学对LINC01116的靶分子进行了预测,随后在RNA和蛋白质水平初步对预测结果进行验证,并通过双荧光素酶报告基因实验对预测的结果进行进一步验证。最后,我们通过一系列的回复实验进一步验证了 LINC01116调控ccRCC进展的分子生物学机制,从而为临床ccRCC的靶向治疗提供新的思路。第一部分LINC01116在ccRCC中的表达及其临床意义目的:筛选ccRCC中异常表达的lncRNA,验证LINC01116在ccRCC细胞系和ccRCC组织中的表达水平,并分析其表达水平与患者临床病理学特征以及预后的关系。方法:通过GEPIA数据库初步筛选出在ccRCC中异常表达的lncRNA;利用RT-qPCR验证LINC01116在ccRCC细胞系和ccRCC组织中的表达水平;分析ccRCC组织中LINC01116的表达水平与ccRCC患者临床病理学之间的相关性;通过Kaplan-Meier生存分析绘制患者生存曲线图;利用核质分离实验验证LINC01116在ccRCC细胞中的亚细胞定位。结果:GEPIA数据库的分析结果显示,LINC01116在ccRCC组织中的表达高于在正常肾组织中的表达,差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示,LINC01116在各个ccRCC细胞系中的表达均高于其在正常肾小管上皮细胞HK-2中的表达,差异有统计学意义;LINC01116在ccRCC组织中的表达高于在癌旁配对组织中的表达,差异有统计学意义。根据LINC01116在ccRCC组织中表达水平的中位数值,将其分为高表达组和低表达组,并对两组患者的临床病理学特征及预后进行比较,发现LINC01116的高表达与较大的肿瘤以及较高的临床分期相关;生存分析结果显示,LINC01116的高表达与患者的总生存率和无病生存率降低相关。核质分离实验结果显示,LINC01116在ccRCC细胞系中的亚细胞定位主要位于细胞质。结论:LINC01116在ccRCC中高表达,并且与较差的临床病理学特征和患者的不良预后相关。第二部分LINC01116对ccRCC细胞体外和体内生物学行为的影响目的:探讨LINC01116在体外和体内对ccRCC细胞增殖、侵袭、迁移等生物学功能的影响。方法:向ccRCC细胞中转染siRNA或sh-RNA干扰LINC01116的表达,利用RT-qPCR对转染效率进行检测;利用CCK8实验及克隆形成实验检测LINC01116对ccRCC细胞增殖能力的影响,Transwell迁移和侵袭实验检测LINC01116对ccRCC细胞迁移和侵袭能力的影响,流式细胞周期实验检测LINC01116对ccRCC细胞周期的影响;Western blot实验检测LINC01116对Notch信号通路的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测LINC01116对ccRCC细胞体内成瘤能力的影响,并用免疫组化法检测LINC01116对ccRCC细胞增殖活性的影响。结果:RT-qPCR结果显示,转染siRNA或sh-RNA可使ccRCC细胞中LINC01116的表达明显降低。CCK8实验及克隆形成实验结果显示干扰LINC01116的表达可以使ccRCC细胞的增殖能力减弱;Transwell迁移实验结果显示干扰LINC01116的表达可以使ccRCC细胞的迁移能力下降;Transwell侵袭实验结果显示干扰LINC01116的表达可以使ccRCC细胞的侵袭能力降低;流式细胞周期实验结果显示,下调LINC01116的表达可使ccRCC细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期。Western blot实验结果表明,下调LINC01116的表达可使Notch信号通路相关蛋白中的Notch 1和Hes 1的表达降低。裸鼠成瘤实验结果显示,下调LINC01116的表达可以抑制ccRCC细胞的体内成瘤能力;免疫组化结果显示,下调LINC01116的表达可使ccRCC细胞的增殖活性降低。结论:沉默LINC01116的表达可使ccRCC细胞的体外增殖、侵袭及迁移能力减弱,并可使细胞周期受到阻滞;沉默LINC01116的表达可以抑制Notch信号通路;沉默LINC01116的表达可使ccRCC细胞的体内成瘤能力及增殖活性下降。第三部分LINC01116通过抑制miR-766-3p的表达促进ccRCC的恶性进展目的:探讨ccRCC细胞中LINC01116的靶向miRNA及其作用机制。方法:利用生物信息学预测LINC01116的下游靶分子;采用RT-qPCR对预测结果进行验证,并检测miR-766-3p在ccRCC细胞中的表达情况;采用双荧光素酶报告基因实验验证LINC01116和miR-766-3p之间的结合关系;通过CCK8实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验等一系列回复实验验证抑制miR-766-3p的表达是否可以使沉默LINC01116对ccRCC细胞恶性表型的抑制作用得到部分回复。结果:生物信息学预测结果显示miR-766-3p可能是ccRCC细胞中LINC01116的下游靶分子之一。RT-qPCR结果显示miR-766-3p在ccRCC细胞中低表达,且其表达水平随着LINC01116表达水平的降低而升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-766-3p与LINC01116之间存在结合关系。回复实验结果显示抑制miR-766-3p的表达可使沉默LINC01116对ccRCC细胞恶性表型的抑制作用得到部分回复。结论:LINC01116与miR-766-3p之间存在结合关系,LINC01116通过抑制miR-766-3p的表达,从而促进ccRCC的恶性进展。第四部分LINC01116通过miR-766-3p/DDX11轴促进ccRCC的恶性进展目的:筛选ccRCC细胞中LINC01116/miR-766-3p轴的下游靶分子,探讨其具体作用机制。方法:利用生物信息学预测miR-766-3p的下游靶分子;采用RT-qPCR对预测结果进行验证,并检测向ccRCC细胞中转染miR-766-3p inhibitor后DDX11的表达情况;采用Western blot实验在蛋白质层面检测DDX11在ccRCC细胞和ccRCC组织中的表达情况;采用免疫组化实验检测DDX11在裸鼠肿瘤组织中的表达情况;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-766-3p和DDX11之间的结合关系;利用RT-qPCR和Western blot实验检测向ccRCC细胞中共转染si-LINC01 116和miR-766-3p inhibitor 后 DDX11 的表达情况。结果:生物信息学预测结果显示DDX11可能是ccRCC细胞中miR-766-3p的下游靶分子之一。RT-qPCR和Western blot实验结果显示DDX11的表达水平随着miR-766-3p表达水平的降低而升高。Western blot实验结果显示ccRCC组织中DDX11的表达水平明显高于配对的癌旁组织。免疫组化实验结果显示sh-LINC01116组裸鼠肿瘤组织中DDX11的表达水平明显低于sh-NC组。双荧光素酶报告基因实验结果显示DDX11存在与miR-766-3p直接结合的位点。RT-qPCR 和 Western blot 实验结果显示共转染 si-LINC01 116 和 miR-766-3p inhibitor可使miR-766-3p inhibitor对DDX11的表达的促进作用减弱。结论:DDX11与miR-766-3p之间存在结合关系,LINC01116可以通过抑制miR-766-3p来上调DDX11的表达,从而促进ccRCC的恶性进展。