β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GUS)，是人体重要的酸性水解酶，参与机体的生理、病理及药物的代谢等过程，能特异性水解葡萄糖醛酸苷键并释放出葡萄糖醛酸及其配基。天然存在的甘草酸主要为18β-甘草酸(18β-GL)，在一定条件下可以转化为差向异构体18α-甘草酸(18α-GL)，其抗炎作用强，肝脏靶向性高，副作用小，安全性强，更适用于临床肝病的治疗。由于18β-GL能在β-GUS的作用下水解失去一分子葡萄糖醛酸基，得到具有更甜味性能以及生物活性的18β-GAMG，因而应用β-GUS对18α-GL进行分子结构改造，有望得到比18α-GL生物活性相似或更高，且具有靶向性的化合物。　　 本文以18α-甘草酸为原料，运用鸭肝β-GUS作为催化剂，特异性水解其远端葡萄糖醛酸基，成功制备了新化合物18α-单葡萄糖醛酸甘草次酸(18α-GAMG)。同时针对酶转化过程中存在的酶运行周期短的缺点，采用固定化技术对β-GUS进行优化，并将固定化酶应用到18α-GL的转化体系中。论文主要工作如下：　　 1.酶转化体系中18α-GL及18α-GAMG分析方法的建立：　　 建立了在酶转化体系中反向HPLC法测定18α-GL及18α-GAMG的方法。采用Apollo C18分析柱(4.6×250 mm，5μm)，流动相为V(甲醇)：V(水)：V(冰醋酸)=80:20:5。在线性范围0.2～20μg内，18α-GL的线性回归方程为：C=5.24×10-6×A+6.26×10-3，r=0.9998；18α-GAMG的线性回归方程为：C=4.01×10-6×A+6.90×10-3，r=0.9991。精密度试验：18α-GL的RSD值为1.60％；18α-GAMG的RSD值为1.79％。加样回收率试验：18α-GL的回收率为99.1％～100.3％，RSD为1.18％～1.47％；18α-GAMG的回收率为96.0％～98.7％，RSD为0.90％～2.12％。当信噪比为2时，18α-GL的最小检测限为46 ng；18α-GAMG的最小检测限为32 ng。　　 2.β-GUS在18α-GL转化中的应用：　　 应用鸭肝制备的β-GUS酶粉用于18α-GL转化的研究，对反应条件进行了优化，得出酶粉转化18α-GL制备18α-GAMG的最适温度为45℃，最适pH为6.0。　　 3.β-GUS的固定化及其在18α-GL转化中的应用：　　 (1)通过不同凝胶包埋体系的试验，确定卡拉胶作为包埋β-GUS的载体。对卡拉胶固定化体系进行优化，选择4％胶浓度，加酶量0.75g/g，KCl溶液浓度0.4 mol/L，固定化时间为4 h的基本固定条件。　　 (2)研究固定化酶的稳定性，结果表明其温度稳定性范围在50℃以下，pH稳定性范围在5～7。这与酶粉的稳定性相似，这是由于卡拉胶本身通透性较好，温度、pH的变化能够直接影响酶的性质。该固定化酶用于转化18α-GL，每12 h一批，连续反应10批后，相对酶活仍保持在75％。　　 (3)应用固定化酶转化18α-GL生产18α-GAMG，研究影响酶转化过程的因素，结果表明酶的颗粒大小对转化没有影响，转化随着酶量、反应时间、温度、pH等的变化有所不同。确定了最适反应温度为45～50℃，最适pH为6.0。　　 4.采用NKA树脂对酶转化反应液进行纯化，得到纯度最高为95.2％的样品。采用质谱，一维、二维核磁共振对样品进行结构鉴定，确定其结构为3-β-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸基)-18α-甘草次酸。