背景目的:类风湿性关节炎(RA)是一种以关节病变为主的全身性自身免疫性疾病,其关节呈慢性炎症性破坏,致残率高,治疗药物虽较多,但疗效不甚理想,因此对RA的治疗仍需更深入的研究。骨保护素(OPG)是一种具有抑制破骨细胞分化和骨吸收作用的分泌型糖蛋白,属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,研究表明OPG的主要功能是抑制破骨细胞前体细胞的分化、存活、融合,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性,并诱导其凋亡。此外,研究发现热休克蛋白70(HSP70)肽段可通过调节T细胞功能抑制动物模型关节炎症。为阻止RA中骨破坏和关节炎症损伤这两大病理改变,此前本课题组将人骨保护素的功能性片断与结核杆菌HSP70的功能片断连接,构建和表达了融合蛋白,经体外生物学活性检测表明该蛋白具有抑制破骨细胞生长和抑制炎症反应的作用。在此基础上,本课题将进一步研究人骨保护素-分支杆菌热休克蛋白70(OPG-HSP70)融合蛋白对胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠炎症和骨破坏的抑制作用。　　 方法:将pET-28a-OPG-HSP70转化的菌株经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹鉴定该融合蛋白,然后大量表达,经凝胶过滤层析纯化、透析复性。将小鼠分为阴性组、阳性组、OPG-HSP70组、OPG组、HSP70组和MTX(甲氨蝶呤)组,除阴性组外,其余各组均制备胶原诱导的关节炎模型(CIA),并给予对应药物治疗,观察药物对小鼠的作用。　　 结果:病理学观察显示,OPG-HSP70组的关节炎评分明显减低,与阳性组比较有明显差异(P<0.01);病理学切片显示OPG-HSP70融合蛋白的治疗能明显抑制CIA小鼠中炎性细胞的浸润和血管翳的生成,且病理学评分与阳性组比较有明显差异(P<0.01);骨影像学显示OPG-HSP70融合蛋白的治疗能明显改善骨破坏和骨质疏松,影像学评分与阳性组比较有明显差异(P<0.01)。免疫学检测表明,OPG-HSP70融合蛋白的治疗能降低CIA小鼠炎性细胞因子IL-1β的表达量;OPG-HSP70组小鼠血清中抗Ⅱ型胶原抗体浓度明显减低,与阳性组比较有明显差异(P<0.01);OPG-HSP70组小鼠血清中OPG/RANKL的比值明显升高,与阳性组比较有明显差异(P<0.01)。　　 结论:OPG-HSP70融合蛋白对CIA小鼠炎症和骨破坏具有抑制作用。