论文部分内容阅读
目的：
制备阿奇霉素和克林霉素免疫缺陷大鼠发酵支原体(Mycoplasma fermentans,Mf)梨支原体(Mycoplasma pirum,Mpi)致死性感染保护模型,探讨抗生素对免疫缺陷大鼠Mf和Mpi致死性感染的保护的作用。试图为HIV免疫缺陷患者Mf和Mpi的致死性感染的治疗提供实验依据。
方法：
用对数生长期的Mf、Mpi经腹腔分别感染免疫缺陷大鼠和非免疫缺陷大鼠,保护组肌肉注射阿奇霉素和克林霉素。计算致死率,观察心、肺、肾和脑等重要器官超微结构改变以及比较大鼠血清细胞因子变化。
1.培养基
改良的SP4(用于Mpi、Mf等支原体的分离培养)液体和固体培养基。
2.标准菌株来源
已知标准对照菌株Mf、Mpi和分别由东南大学医学院流行病学教研室赵季文教授惠赠。
3.抗菌药物准备:抗菌药物稀释参照文献[43,44]钔操作。菌株最小杀菌浓度(MBCs)和最小抑菌浓度(MICs)测定:MBCs(Minimal bactericidal concentration)测定采用试管法,MICs(Minimal inhibitory concentrations),采用平板法,参照文献[6,7]操作进行。
4.实验动物与分组
4.1免疫缺陷大鼠模型的制备:隔日腹腔注射环磷酰胺,3次制成免疫缺陷模型。
4.2实验组
免疫缺陷大鼠随机分为4组。分别为Mf(阿奇霉素)、Mpi(阿奇霉素)、Mf(克林霉素)、Mpi(克林霉素),腹腔注射对数生长期的支原体菌液,同时肌肉注射相应抗生素。
4.3对照组
免疫缺陷和正常大鼠分5组,分为NS正常大鼠组、Mf感染正常大鼠组、Mpi感染正常大鼠组、Mf感染免疫缺陷大鼠组、Mpi感染免疫缺陷大鼠组,腹腔注射等剂量NS和Mf或Mpi菌液。
5.大鼠培养以及支原体的再培养
各组死亡大鼠均进行血液及其器官组织的支原体再培养以及普通培养以排除血液其他细菌的感染。
6.各组大鼠观察及致死率比较
7.血清细胞因子检测
各组心脏无菌采血分离血清,采用ELISA法检测大鼠血清IL-10、TNF-α、IL-1β和IL-6,比较组间差异。
8.电镜标本的制作与观察
分别取死亡组大鼠的心、肺、肾和脑等重要脏器组织经2.5％戊二醛和1％锇酸双重固定,丙酮梯度脱水,Epon-812环氧树脂包埋,RMC-PT超薄切片机切片,半薄切片光镜定位于组织实质细胞部分,超薄切片经铅-铀双重染色,H-7500透射电镜下观察,拍片。
9.统计学分析
采用SPSS13.0软件对测量数据进行单因素方差分析和Fisher确切概率法进行数据处理。
结果：
1.大鼠血培养及支原体再培养结果
大鼠血清普通培养未见其它细菌污染,支原体再培养中支原体感染组大鼠都各自分离到相应的支原体,NS组大鼠均未分离到上述支原体。
2.大鼠感染致死结果
免疫缺陷Mf或Mpi攻击组较非免疫缺陷M喊Mpi攻击组死亡率显著升高,差异显著(P<0.01)；阿奇霉素和克林霉素保护实验组大鼠存活率与相应Mf或Mpi攻击组对照组比较有显著性差异(P<0.01)；阿奇霉素与克林霉素保护实验组大鼠存活率比较无显著性差异(P>0.05)。
3.血清细胞因子检测比较
(1)抗生素(阿奇霉素、克林霉素)保护组大鼠血清TNF-α、L-1β和IL-6的含量明显低于支原体感染组(免疫缺陷与非免疫缺陷)大鼠组(P<0.01),而IL-10的含量明显高于非免疫缺陷支原体感染组大鼠组(P<0.01)。
(2)支原体(Mf、Mpi)感染免疫缺陷组大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6含量均明显低于支原体(Mf、Mpi)感染非免疫缺陷大鼠组(P<0.01),IL-10的含量明显高于支原体(Mf、Mpi)感染非免疫缺陷大鼠组(P<0.01)。
(3)支原体感染组(免疫抑制与非免疫抑制)大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均明显高于NS正常组(P<0.01),而IL-10的含量明显低于NS正常组(P<0.01)。
(4)抗生素(阿奇霉素、克林霉素)保护组大鼠血清TNF-α、L-1β、IL-6和IL-10的含量与NS正常组大鼠无明显差别(P>0.05)。
(5)阿奇霉素与克林霉素保护组大鼠血清TNF-α、L-1β、IL-6和IL-10的含量无明显差别(P>0.05)。
4.心、肺、肾和脑超微结构的改变
支原体感染免疫缺陷组大鼠死亡后各脏器都出现相应的病理改变,呈现多种器官的严重损害,表现为心肌纤维不同程度溶解,肺泡空泡样改变,细胞的脱落、炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞破坏、核固缩等；而抗生素保护大鼠组器官超微结构病变与感染组比较明显减轻。
结论：
1.阿奇霉素与克林霉素能显著减轻由于Mf,Mpi感染引起的免疫缺陷大鼠多脏器损伤,降低致死率。
2.Mf,Mpi致病性与机体免疫系统状态有着一定的相关性,免疫缺陷可以增加支原体的易感性。
3.Mf,Mpi感染后炎症过程TNF-α、IL-1β和IL-6等前炎症因子的过度释放、是导致免疫缺陷大鼠全身多种器官损害的重要因为。