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目的:通过在氯化钴(Cobalt chloride,Co Cl2)模拟的缺氧条件下,探索THP对肝癌Hep G2细胞增殖、糖酵解和凋亡的影响。方法:(1)通过不同浓度的Co Cl2处理肝癌细胞:采用浓度为0、50、100、150、200和300μmmol/L的Co Cl2处理Hep G2细胞,随后采用CCK8检测细胞增殖;葡萄糖试剂盒检测细胞葡萄糖摄取量;乳酸试剂盒检测乳酸生成量;蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测葡萄糖转运蛋白-4(Glucose transporter-4,GLUT4)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、己糖激酶-2(Hexokinase-2,HK2)、丙酮酸激酶-2(Pyruvate kinase-2,PKM2)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2protein,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2 associated x Drotein,Bax)和caspase-3蛋白表达水平。(2)在Co Cl2模拟的缺氧条件下THP处理肝癌细胞:采用不同浓度THP(0、0.625、1.25、2.5、5和10μmmol/L)处理Hep G2细胞,通过CCK8检测细胞的增殖情况,以获取THP的IC50。随后将实验分Control组、THP组、Co Cl2组和Co Cl2+THP组,分别处理肝癌细胞24 h,采用CCK-8检测细胞增殖情况;葡萄糖试剂盒检测细胞葡萄糖摄取量;乳酸试剂盒检测乳酸生成量;WB检测HIF-1α、VEGF、糖酵解相关蛋白(GLUT4、HK2、PKM2和LDHA和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、caspase-3和caspase-8)的表达水平。(3)统计分析:实验结果及数据使用Graphpad Prism 9软件作图及分析;实验数据采用均数±标准差(?x+s)表示,组间比较采用单因素方差分析,事后多重比较采用Dunnet t检验或LSD。当P<0.05时有统计学意义,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。结果:(1)不同浓度的Co Cl2处理Hep G2细胞的实验结果显示,低浓度的Co Cl2处理Hep G2细胞后,细胞增殖受限不明显;但随Co Cl2浓度增高,细胞增殖表现出明显抑制。细胞葡萄糖摄取量和乳酸生成量均呈现出随Co Cl2浓度增加呈先升高后下降的趋势,其中Co Cl2浓度为50μmmol/L时乳酸生成量达到峰值,Co Cl2浓度为100μmmol/L时细胞葡萄糖摄取量达到峰值。WB检测结果提示,随Co Cl2浓度增加,HIF-1α、VEGF及GLUT4蛋白的表达水平逐渐升高;LDHA、HK2及PKM2的表达水平呈先上升后下降的趋势,其中Co Cl2浓度为150μmmol/L时糖酵解关键酶(LDHA、HK2及PKM2)的表达水平达到最高;凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平逐渐降低,Bax和caspase-3表达水平逐渐升高。(2)在Co Cl2模拟的缺氧条件下THP处理Hep G2细胞实验结果如下:与Control组相比:Co Cl2组处理肝癌细胞后,细胞增殖率和克隆形成能力降低;葡萄糖摄取量和乳酸生成量增高;HIF-1α、VEGF、GLUT4、LDHA、HK2、PKM2、Bax和caspase-3蛋白的表达水平均增高;Bcl-2及caspase-8蛋白的表达水平降低。THP组处理肝癌细胞后,细胞增殖率及克隆形成能力降低、葡萄糖摄取量及乳酸生成量减少,HIF-1α、VEGF、GLUT4、LDHA、HK2、PKM2蛋白的表达水平均降低;Bcl-2及Bax蛋白表达水平无明显变化;caspase-8和caspase-3蛋白表达水平均增加。Co Cl2+THP组处理肝癌细胞后,细胞增殖率、克隆形成能力、葡萄糖摄取量减低;乳酸生成量无明显差异;WB结果显示HIF-1α、VEGF、GLUT4、LDHA、HK2、PKM2的表达无明显差异;细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-8蛋白的表达减低,Bax和caspase-3蛋白的表达增高。与Co Cl2组相比:THP组处理肝癌细胞后,细胞增殖率、克隆形成能力、葡萄糖摄取量、乳酸生成量及HIF-1α、VEGF、GLUT4、LDHA、HK2、PKM2蛋白的表达水平均降低;Bcl-2、caspase-8和caspase-3蛋白的表达水平增高,Bax蛋白表达水平减低。Co Cl2+THP组处理肝癌细胞后,细胞增殖率、克隆形成能力、葡萄糖摄取量和乳酸生成量减低;WB结果显示HIF-1α、VEGF、GLUT4、LDHA、HK2、PKM2的表达减低;细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax蛋白的表达减低,caspase-3和caspase-8蛋白的表达增高。与THP组处理细胞后相比:Co Cl2+THP组处理肝癌细胞后,细胞增殖率、克隆形成能力、葡萄糖摄取量和乳酸生成量增高;WB结果显示HIF-1α、VEGF、GLUT4、LDHA、HK2、PKM2的表达增高;细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-8蛋白的表达减低,Bax和caspase-3蛋白的表达增高。结论:(1)低浓度Co Cl2处理肝癌细胞后,细胞糖酵解代谢增强。(2)THP处理肝癌细胞后,细胞增殖受限、凋亡增加、糖酵解代谢降低。(3)在Co Cl2模拟的缺氧条件下,THP对细胞增殖、糖酵解代谢的抑制作用减弱,细胞凋亡减少。