论文部分内容阅读
猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的猪瘟是一种高度传染性、通常导致死亡的疾病，会造成养猪业重大经济损失。CSFV与其他真核生物病毒一样，必须借助宿主细胞的成分完成自身的复制增殖。Rab6a是定位于宿主细胞高尔基体的一种小GTP酶，系囊泡转运的重要调节因子。本研究旨在探究Rab6a蛋白对CSFV复制的影响，并了解CSFV E2蛋白在细胞内分布的变化，为阐明Rab6a蛋白对CSFV复制的调控作用提供新的科学资料，获得了以下研究结果。 （1）Rab6a对CSFV的复制有正向调控作用。敲低Rab6a表达后，CSFV的复制受到显著抑制（P＜0.05）；过表达Rab6a后，CSFV的复制受到显著促进（P＜0.05）。突变体Rab6a Q72L（GTP）、Rab6a T27N（GDP）对CSFV复制均起显著抑制作用（P＜0.05），提示Rab6a蛋白GTP形式和GDP形式的正常转换是CSFV复制的重要因素。 （2）Rab6a促进CSFV病毒粒子的产生。干扰Rab6a表达后，细胞上清中病毒粒子产量明显降低；过表达Rab6a后，细胞上清中病毒粒子产量明显增加；突变体Rab6a Q72L（GTP）、Rab6a T27N（GDP）分别处理后的细胞上清中病毒粒子产量均明显降低，说明Rab6a具有促进CSFV病毒粒子产生的作用。 （3）Rab6a介导E2蛋白的胞内运输。PK-15细胞共同转染Rab6a和E2蛋白重组质粒，通过激光共聚焦显微镜观察E2蛋白在胞内的分布变化，发现Rab6a介导CSFV E2蛋白由核周围向细胞膜的转运。 （4）CSFV感染PK-15细胞后对胞内Rab6a的转录水平和蛋白水平无明显影响。应用real-time PCR及Western blot检测CSFV感染PK-15细胞后对Rab6a转录水平和蛋白表达量的影响，结果显示CSFV感染PK-15细胞后Rab6a转录水平和蛋白表达量无显著变化（P＞0.05）。 综上所述，本研究发现Rab6a蛋白促进CSFV的复制，对CSFV子代病毒的产生具有重要作用；Rab6a蛋白介导CSFV E2由核周围向细胞膜的转运。研究结果为进一步阐明Rab家族对CSFV复制的影响及了解CSFV在宿主细胞内的转运提供了新的科学资料。