耐亚磷酸盐转基因油菜的创建和抗性评价

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杂草伴随油菜整个生产过程,严重影响了油菜产量和品质。除草剂长期过量使用,导致抗除草剂杂草出现,人工除草费时费力且效率低,因此很有必要开发新的杂草控制系统。亚磷酸盐(Phi)无法被植物直接利用,且抑制植物生长。罗尔斯通菌属(Raltsonia.sp.strain 4506)中ptx D(phosphite dehydrogenase)蛋白139位的酪氨酸突变为谷氨酰胺(Y139Q)后能够提高其催化Phi转化为正磷酸盐(Pi)的活性。本研究通过遗传转化将ptx DQ转入甘蓝型油菜,对其在Phi条件下的生长特性,以及和杂草的竞争性进行分析。结果如下:(1)Phi抑制油菜生长发育。本研究用不同Phi浓度梯度处理甘蓝型油菜并对其表型进行分析,发现随着Phi浓度的升高,其对油菜生长抑制越显著,当浓度为4 m M Phi时,油菜株高、鲜重和根长分别下降了47%、49%和65%左右。(2)ptx DQ/Phi作为油菜遗传转化显性筛选标记需进一步探索。本研究构建了包含ptx DQ和hpt筛选标记基因的植物表达载体p1300-35S::ptx DQ,在油菜转化过程中,以1 m M Phi为筛选剂时,外植体仅有愈伤而无法再分化。当加入微量的Pi,即以1.5 m M Phi+0.5 m M Pi为筛选剂时,获得了11株再生植株,但未鉴定到阳性株系。以潮霉素为筛选剂时,共鉴定到6株阳性转基因株系。因此,在目前试验条件下,Phi尚无法用于农杆菌介导的油菜遗传转化筛选。(3)35S::ptx DQ转基因油菜在Phi条件下比WT和杂草具有更强竞争优势。对35S::ptx DQ转基因油菜中ptx DQ表达水平的检测发现,ptx DQ在转基因油菜的根、茎、叶组织中都有表达。将35S::ptx DQ转基因油菜与野生型油菜(WT)和杂草以Phi或Pi为唯一磷源进行处理,发现与Pi处理相比,WT和杂草在Phi条件下的生物量分别下降了72%和58%左右,而35S::ptx DQ转基因油菜无显著差异,且35S::ptx DQ转基因油菜磷饥饿响应基因PT21、PT24、PT1:4和PHR表达量在Phi条件下未显著上调,此外35S::ptx DQ转基因油菜在Phi条件下积累更多正磷酸盐。综上所述,35S::ptx DQ转基因油菜具有将Phi转化为Pi的能力,从而赋予其在Phi条件下比野生型油菜和杂草更强的生长竞争优势,表明ptx DQ/Phi是有效的油菜磷利用和杂草控制系统,为有效解决油菜磷利用和杂草控制提供了新的可行方案。
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