论文部分内容阅读
选用锦龟头部、树鼩肝脏作为实验酶源，首先采用正交实验对锦龟、树鼩肝酶促反应体系条件进行了优化，最后测定了其对17种农药的敏感性，为科学评估其是否可作为酶抑制法酶源提供实验依据。主要研究成果如下：
1、锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶酶促反应体系优化
(1)锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶酶活较高，可作为酶抑制法的实验酶源。锦龟乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱酯酶特异性抑制剂敏感。树鼩肝酯酶对酯酶特异性抑制剂敏感。
(2)锦龟乙酰胆碱酯酶酶促反应影响因子大小为顺序：pH>温度>反应时间。最佳反应体系为：底物终浓度0.5mM、pH7.5、温度35℃、时间15min。
(3)树鼩肝酯酶酶促反应影响因子大小为顺序：温度＞pH＞时间。最佳反应体系为：底物终浓度2.0mM、温度25℃、pH8.0、时间15min。
2、锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶对农药敏感性研究
(1)11种有机磷类农药(敌百虫、速灭磷、敌敌畏、磷胺、辛硫磷、久效磷、甲胺磷、对硫磷、乐果、氧化乐果、毒死蜱)中五种有机磷类农药(敌敌畏、辛硫磷、速灭磷、敌百虫、磷胺)抑制率较高；抑制率均随农药浓度增加而增加。
(2)锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶对上述五种有机磷类农药的IC50差异大，IC50最大是最小的15491倍。锦龟乙酰胆碱酯酶对五种有机磷类农药的敏感性：敌百虫>敌敌畏>速灭磷>辛硫磷>磷胺。树鼩肝酯酶对五种有机磷类农药的敏感性：敌敌畏>速灭磷>敌百虫>磷胺>辛硫磷。锦龟乙酰胆碱酯酶对敌百虫、敌敌畏、辛硫磷这三种有机磷类农药的IC50分别为数量级：10-10、10-9、10-6；树鼩肝酯酶对速灭磷这种有机磷类农药的IC50为数量级：10-8。两种酶对含P=O基团有机磷类农药(敌百虫、敌敌畏、速灭磷)总体(磷胺除外)敏感性强于含P=S基团的有机磷类农药(辛硫磷)。
(3)六种氨基甲酸酯类农药(丁硫克百威、克百威、速灭威、灭多威、涕灭威、甲萘威)中五种氨基甲酸酯类农药(克百威、速灭威、灭多威、涕灭威、甲萘威)抑制率较高；抑制率均随农药浓度增加而增加。
(4)锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶对上述五种氨基甲酸酯类农药的IC50差异较小，IC50最大是最小的21倍。锦龟乙酰胆碱酯酶对五种氨基甲酸酯类农药的敏感性：涕灭威>甲萘威>灭多威>克百威>速灭威。树鼩肝酯酶对五种氨基甲酸酯类农药的敏感性：甲萘威>速灭威>涕灭威>克百威>灭多威。锦龟乙酰胆碱酯酶对灭多威、涕灭威这两种氨基甲酸酯类农药的IC50均为数量级：10-6。树鼩肝酯酶对甲萘威、速灭威这种两种氨基甲酸酯类农药的IC50分别为数量级：10-7、10-6。
(5)对17种农药的抑制率情况进行综合比较，两种酶有机磷农药总体上抑制率要高于氨基甲酸酯类农药；由两种酶对两种酶对17种农药的敏感性IC50值进行整体分析可知，两种酶对有机磷农药农药的敏感性要高于氨基甲酸酯类；两种酶对有机磷农药敏感性IC50值范围跨度大于氨基甲酸酯类农药，说明氨基甲酸酯类农药在结构及抑制作用机制上相似性大于有机磷农药。
(6)对敌百虫、敌敌畏、速灭威农药敏感性高于本实验室之前电鳗AChE(敌百虫IC50为10-7、敌敌畏IC50为10-6)和蟑螂AChE(速灭威IC50为10-6)。
1、锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶酶促反应体系优化
(1)锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶酶活较高，可作为酶抑制法的实验酶源。锦龟乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱酯酶特异性抑制剂敏感。树鼩肝酯酶对酯酶特异性抑制剂敏感。
(2)锦龟乙酰胆碱酯酶酶促反应影响因子大小为顺序：pH>温度>反应时间。最佳反应体系为：底物终浓度0.5mM、pH7.5、温度35℃、时间15min。
(3)树鼩肝酯酶酶促反应影响因子大小为顺序：温度＞pH＞时间。最佳反应体系为：底物终浓度2.0mM、温度25℃、pH8.0、时间15min。
2、锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶对农药敏感性研究
(1)11种有机磷类农药(敌百虫、速灭磷、敌敌畏、磷胺、辛硫磷、久效磷、甲胺磷、对硫磷、乐果、氧化乐果、毒死蜱)中五种有机磷类农药(敌敌畏、辛硫磷、速灭磷、敌百虫、磷胺)抑制率较高；抑制率均随农药浓度增加而增加。
(2)锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶对上述五种有机磷类农药的IC50差异大，IC50最大是最小的15491倍。锦龟乙酰胆碱酯酶对五种有机磷类农药的敏感性：敌百虫>敌敌畏>速灭磷>辛硫磷>磷胺。树鼩肝酯酶对五种有机磷类农药的敏感性：敌敌畏>速灭磷>敌百虫>磷胺>辛硫磷。锦龟乙酰胆碱酯酶对敌百虫、敌敌畏、辛硫磷这三种有机磷类农药的IC50分别为数量级：10-10、10-9、10-6；树鼩肝酯酶对速灭磷这种有机磷类农药的IC50为数量级：10-8。两种酶对含P=O基团有机磷类农药(敌百虫、敌敌畏、速灭磷)总体(磷胺除外)敏感性强于含P=S基团的有机磷类农药(辛硫磷)。
(3)六种氨基甲酸酯类农药(丁硫克百威、克百威、速灭威、灭多威、涕灭威、甲萘威)中五种氨基甲酸酯类农药(克百威、速灭威、灭多威、涕灭威、甲萘威)抑制率较高；抑制率均随农药浓度增加而增加。
(4)锦龟乙酰胆碱酯酶、树鼩肝酯酶对上述五种氨基甲酸酯类农药的IC50差异较小，IC50最大是最小的21倍。锦龟乙酰胆碱酯酶对五种氨基甲酸酯类农药的敏感性：涕灭威>甲萘威>灭多威>克百威>速灭威。树鼩肝酯酶对五种氨基甲酸酯类农药的敏感性：甲萘威>速灭威>涕灭威>克百威>灭多威。锦龟乙酰胆碱酯酶对灭多威、涕灭威这两种氨基甲酸酯类农药的IC50均为数量级：10-6。树鼩肝酯酶对甲萘威、速灭威这种两种氨基甲酸酯类农药的IC50分别为数量级：10-7、10-6。
(5)对17种农药的抑制率情况进行综合比较，两种酶有机磷农药总体上抑制率要高于氨基甲酸酯类农药；由两种酶对两种酶对17种农药的敏感性IC50值进行整体分析可知，两种酶对有机磷农药农药的敏感性要高于氨基甲酸酯类；两种酶对有机磷农药敏感性IC50值范围跨度大于氨基甲酸酯类农药，说明氨基甲酸酯类农药在结构及抑制作用机制上相似性大于有机磷农药。
(6)对敌百虫、敌敌畏、速灭威农药敏感性高于本实验室之前电鳗AChE(敌百虫IC50为10-7、敌敌畏IC50为10-6)和蟑螂AChE(速灭威IC50为10-6)。