论文部分内容阅读
鹅细小病毒(Goose parvovirus GPV)为细小病毒科的成员,主要侵害2至18日龄雏番鸭及雏鹅,且当雏鹅感染GPV在1-4日龄间,病死率最高。本病于我国,东南亚,欧洲等地均有学者报道发生。该病在鹅群及番鸭群内传播方式多样,同时死亡率高。20日龄内雏鹅高度易感,死亡率在90%以上。为进一步了解YBLJ株GPV对东北白鹅的致病性,因此本次试验初步建立YBLJ株GPV强毒感染3日龄雏鹅的模型。首先将分装保存的YBLJ株GPV稀释为1.5×101PFU/mL、1.5×102 PFU/mL、1.5×103PFU/mL、1.5×104PFU/mL、1.5×105PFU/mL、1.5×106PFU/mL,对42只3日龄未经免疫的东北白鹅进行攻毒,分离饲养,并设立阴性对照组。攻毒后第2日,雏鹅开始出现不同程度GPV症状,攻毒后第3日最急性型感染雏鹅抽搐后死亡,病理剖检后观察各脏器病变,初步诊断为感染GPV死亡。攻毒后第5日,对全部雏鹅麻醉后采血,提取DNA后进行GPV-VP3 PCR扩增,从而确定最佳攻毒剂量。再对最佳剂量组肝脏、胰腺、盲肠、心脏、脾脏进行组织PCR与免疫组化检测,通过比较不同脏器中GPV阳性抗原分布,从而初步建立了 YBLJ株GPV免疫组化方法。结果显示,对3日龄雏鹅按不同浓度攻毒后,出现不同程度的角弓反张、极度消瘦等典型GPV症状。雏鹅剖检可见眼部、胸腺及内脏部位均有不同程度病变。血液PCR结果表明,不同攻毒剂量的雏鹅,血液中GPV-VP3基因浓度不一,且攻毒剂量为1.5×106 PFU/mL为最佳攻毒剂量,组织PCR分别在心脏、肝脏、盲肠、脾脏中检出GPV-VP3基因,而未在胰腺中检出。病理学HE染色结果显示,攻毒剂量为1.5×106PFU/mL雏鹅盲肠、心脏组织中均有炎性细胞浸润,胰腺、脾脏、肝脏有不同程度的充血,提示雏鹅已初步开始出现心包炎、渗出性肠炎的病理变化。免疫组化最佳条件为石蜡切片厚度为4μm,微波修复14min,一抗浓度1:100,一抗反应时间37℃、60min,DAB显色4 min。免疫组化结果显示,盲肠上皮细胞中GPV分布较为广泛,而脾脏、肝脏、心脏血管内可见明显GPV分布,阳性GPV抗原数量为“++”,颜色为黄色至棕色不等,但胰腺中未检出GPV抗原,判定为“-”,表明本次试验YBLJ株GPV对雏鹅盲肠、肝脏、心脏、脾脏侵害更为严重。YBLJ株鹅细小病毒感染雏鹅动物模型及免疫组化方法的初步建立,为后期进一步针对YBLJ株GPV的体内试验初步奠定基础,最终将为GPV的诊断与防治提供参考。