【摘 要】
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红曲色素是红曲霉发酵过程中形成的一类聚酮类混合物,具有多种生理功能,如降血脂、抗炎、抗氧化等。研究发现,红曲色素中起主要降脂作用的是红曲黄色素,但其作用机制尚不清楚。本文通过MTT实验研究三种红曲黄色素对HepG2细胞增殖的影响;利用油红O染色初步探究红曲黄色素对HepG2细胞内脂质的影响,并对细胞内TC、TG含量进行检测;根据甲羟戊酸对细胞增殖的补偿效果,筛选出对细胞增殖具有显著补偿作用的红曲黄
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红曲色素是红曲霉发酵过程中形成的一类聚酮类混合物,具有多种生理功能,如降血脂、抗炎、抗氧化等。研究发现,红曲色素中起主要降脂作用的是红曲黄色素,但其作用机制尚不清楚。本文通过MTT实验研究三种红曲黄色素对HepG2细胞增殖的影响;利用油红O染色初步探究红曲黄色素对HepG2细胞内脂质的影响,并对细胞内TC、TG含量进行检测;根据甲羟戊酸对细胞增殖的补偿效果,筛选出对细胞增殖具有显著补偿作用的红曲黄色素;通过HMG-CoA还原酶活性测定、RT-qPCR及Western Blot实验探究其降脂机制。三种黄色素中,浓度为8μg/mL的Monascin和红曲黄色素A能明显降低HepG2细胞内脂质含量,其中红曲黄色素A的降低效果最明显。经测定得出,Monascin组和红曲黄色素A组胆固醇含量分别降低35.61%、62.99%,甘油三酯含量分别降低10.71%、47.49%,Monacolin K组胆固醇含量降低44.1%,甘油三酯含量并未降低。在降脂作用机制的研究中发现,加入浓度为50μ mol/L的甲羟戊酸后红曲黄色素A组HepG2细胞增殖数显著提高,且红曲黄色素A对HMG-CoA还原酶活性具有明显的抑制效果。脂质代谢相关基因的mRNA转录水平的测定结果显示,Monascin作用HepG2细胞后脂代谢基因均显著降低(p<0.01),参考DAPI染色结果推测,可能与细胞凋亡有关;而红曲黄色素A不但能显著降低胆固醇合成基因HMGCR表达(p<0.05),同时可促进脂肪酸β氧化基因PPARα和其下游负责脂肪酸转运的CPT-1的表达,降低脂肪酸合成相关基因SREBP-1c和其下游基因FAS的表达。综上可知,红曲黄色素A可能通过抑制胆固醇和脂肪酸合成、促进脂肪酸β氧化,达到降低HepG2细胞内脂质含量的作用。
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芽孢杆菌是革兰氏阳性菌,具有良好的分泌胞外蛋白能力,是蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多种重要工业酶的生产菌株。随着分子生物学和基因工程的迅速发展,芽孢杆菌作为基因表达系统得以不断发展,展现出良好的应用前景。其中启动子元件在芽孢杆菌表达系统中发挥着重要作用,现有的芽孢杆菌启动子不足以满足工业上利用芽孢杆菌大量表达外源基因的要求,因此寻找新型的强启动子是非常必要的。本研究旨在克隆新型芽孢杆菌启动子,完善和优
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生姜既是常用的香料和功能性食品,也是一种治疗多种疾病的传统中草药。生姜含有很多种生物活性物质,例如生姜精油,多糖类,烯烃类,黄酮类,甾醇类,姜油树脂,姜黄素,姜辣素等。经超临界CO2萃取生姜精油后剩余的姜粉中主要含有黄酮类物质,它具有多种生理功能,如抗氧化、抗癌、抗肿瘤、抗微生物和抗血小板聚集等。为了避免原料的浪费,充分利用其药物价值,本文采用真空减压提取法,大孔吸附树脂法和高速逆流色谱法从生姜萃