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荞麦是一种药食同源的食物,含有众多的生物活性物质。其中苦荞中的多种生物活性物质均高于普通荞麦,类黄酮的含量最为丰富,所含的黄酮中又以芦丁、槲皮素为主。近年来,槲皮素由于可抑制肿瘤细胞的增殖而成为具有潜力的抗肿瘤药物,成为各国学者关注的焦点。最近研究报道,槲皮素可以诱导细胞发生自噬,但是其详细的机制还未见报道,未形成较一致的见解。本文将采用现代分子生物学及细胞学技术,着重研究Ca2+在槲皮素诱导的Hep G2细胞自噬中的作用,为揭示槲皮素诱导细胞自噬的分子机制增添新的内容。本文采用荧光染色试剂单丹磺酰尸胺(MDC)及pCMV-GFP-LC3质粒转染HepG2细胞,观察槲皮素诱导Hep G2细胞发生自噬；Proteasome-GloTM Cell-Based Reagent检测槲皮素对细胞内蛋白酶体活性的影响；流式细胞术检测槲皮素或钙离子螫合剂作用Hep G2细胞后细胞自噬水平的变化及胞内Ca2+浓度的变化；MTT法和流式细胞仪分别检测3-MA存在时细胞增殖率及凋亡率的变化。检测结果显示,在设定的槲皮素浓度(0-50μg/mL)范围内,其对Hep G2细胞生长有显著的抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性；槲皮素可诱导Hep G2细胞发生自噬和凋亡；槲皮素对Hep G2细胞内蛋白酶体trypsin-like、chymotrypsin-like以及caspase-like酶活性均有显著地抑制作用；同时,槲皮素诱导Hep G2发生自噬过程中细胞内的Ca2+浓度有所升高；在抑制剂BAPTA-AM存在时,与单独槲皮素组相比,细胞自噬水平明显降低,进一步揭示细胞内增加的钙离子主要来自细胞内钙库中钙离子的释放。当槲皮素浓度为0-50μg/mL,作用时间为24h时,3-MA+槲皮素组比槲皮素组的细胞凋亡率有所提高,表明自噬的抑制促进了细胞的凋亡,进一步揭示自噬对细胞起到一定的保护作用。综上所述,槲皮素能明显抑制Hep G2细胞的生长,并诱导其发生保护性自噬。蛋白酶体活性实验分析表明,槲皮素诱导细胞自噬的过程中可能涉及泛素-蛋白酶体降解途径。另一方面槲皮素诱导的Hep G2细胞自噬过程中,细胞内游离钙离子的浓度升高,或许主要来源于细胞内钙库钙离子的释放。这些研究结果对深入了解槲皮素诱导肿瘤细胞自噬的分子机制奠定了前期理论基础。