【摘 要】
：
研究目的力学刺激与牙周健康密切相关。本研究旨在通过检测人牙周膜细胞加载牵张力学刺激后程序性细胞死亡的发生情况、炎症因子IL-1β的分泌情况以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体（NLRP）炎症体复合物通路相关因子基因、蛋白的表达和活化情况,明确NLRP炎症体复合物在牵张诱导人牙周膜细胞程序性死亡和炎症反应中的作用,以期揭示机械力刺激引起牙周组织炎症的作用机制。研究方法1.体外培养人牙周膜细胞并采用免疫组
【基金项目】
：
国家自然科学基金（31470903,31270991,30900282）；
论文部分内容阅读
研究目的力学刺激与牙周健康密切相关。本研究旨在通过检测人牙周膜细胞加载牵张力学刺激后程序性细胞死亡的发生情况、炎症因子IL-1β的分泌情况以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体（NLRP）炎症体复合物通路相关因子基因、蛋白的表达和活化情况,明确NLRP炎症体复合物在牵张诱导人牙周膜细胞程序性死亡和炎症反应中的作用,以期揭示机械力刺激引起牙周组织炎症的作用机制。研究方法1.体外培养人牙周膜细胞并采用免疫组织化学实验确定培养细胞的组织来源特性。采用Flexcell FX-5000体外细胞牵张加载装置对体外培养的人牙周膜细胞施加适当应变值及时间的牵张,免疫荧光染色法观察牵张加载后细胞形态学改变以确认牵张加载的有效性,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测牵张加载后程序性细胞死亡率以及细胞焦亡率的变化,酶联免疫吸附技术（ELISA）检测牵张加载后炎症因子IL-1β的分泌量。2.对体外培养的人牙周膜细胞施加6h和24h的20%牵张应变,采用实时定量PCR以及免疫印迹技术检测caspase-1、caspase-5、ASC、NLRP1、NLRP3以及IL-1β的基因和蛋白表达的变化,采用caspase蛋白酶活性检测试剂盒检测caspase-1、-5蛋白酶活性,采用免疫共沉淀技术分别检测caspase-1或caspase-5与ASC之间的相互作用。3.特异性阻断caspase-1蛋白酶活性,检测牵张作用下程序性细胞死亡率和细胞焦亡率以及炎症因子IL-1β蛋白表达和分泌情况的变化;特异性阻断caspase-5蛋白酶活性,检测牵张作用下程序性细胞死亡率和细胞焦亡率以及IL-1β分泌情况的变化。研究结果1.成功在体外培养得到人牙周膜细胞,对其加载牵张应变后细胞表现出垂直于牵张应变加载方向平行排列的现象;加载20%牵张应变6h和24h后人牙周膜细胞程序性死亡率较对照组上调（P<0.05）;加载20%牵张应变4h和6h后,人牙周膜细胞中IL-1β分泌明显上调（P<0.05）。2.加载20%牵张应变6h后,人牙周膜细胞中NLRP3、caspase-1、caspase-5和IL-1β的m RNA及蛋白表达均较对照组上调（P<0.05）;NLRP1和ASC蛋白表达较对照组上调（P<0.05）,m RNA表达无显著变化。加载20%牵张应变24h后,NLRP3蛋白表达较6h加载组进一步上调（P<0.05）。免疫共沉淀结果显示牵张应变作用下,ASC分别与caspase-1或caspase-5之间发生相互作用。3.阻断caspase-1蛋白酶活性后,加载20%牵张应变6h后程序性细胞死亡率、细胞焦亡率以及IL-1β蛋白表达和分泌量均较未加阻断剂、单纯加载牵张应变组下调（P<0.05）。阻断caspase-5蛋白酶活性后,加载20%牵张应变6h后程序性细胞死亡率、细胞焦亡率及IL-1β分泌量均较未加阻断剂、单纯加载牵张应变组下调（P<0.05）。结论牵张诱导人牙周膜细胞发生程序性细胞死亡,其中包括细胞焦亡的形式,并促进人牙周膜细胞分泌炎症因子IL-1β。NLRP1和NLRP3炎症体通路在牵张作用下激活,参与调控牵张诱导人牙周膜细胞发生程序性细胞死亡以及分泌炎症因子IL-1β的过程。牵张诱导人牙周膜细胞发生程序性细胞死亡及分泌炎症因子的过程依赖于炎症相关的caspase-1及caspase-5蛋白酶的激活。本研究为阐明牵张诱导人牙周膜细胞发生程序性细胞死亡和炎症反应的机理提供了实验数据,对于探索机械力刺激引起牙周组织炎症的作用机制具有科学意义。
其他文献
目的:保留钛金属原有的优良性能,制备具有高强度、低弹性模量的医用钛材,优化材料组织结构及材料表面改性成为当前生物医用植入材料领域的研究热点。本课题旨在探讨采用搅拌摩擦加工（Friction Stir Processing,FSP）工艺对钛表面改性后的表面性能和生物学评价,检测FSP制备金属基纳米复合层（MMNC）的微观结构和综合性能的变化,明确改性表面对骨髓基质干细胞（BMSCs）黏附、增殖和成骨
研究目的:制备一种基于浸提方法的多层生物可降解输尿管支架管,通过体外实验对其降解性能和生物相容性进行评价,并初步在体内实验中对该支架管进行评价。材料和方法:本研究以聚羟基乙酸聚乳酸共聚物（PGLA 90/10）、玉米醇溶蛋白（Zein）和硫酸钡为材料通过浸提方法制备了一种多层结构的生物可降解输尿管支架管,同时对其显影性和机械性能进行了评价。在体外降解实验中,将该可降解支架管和普通商用对照支架管浸入
目的本研究的目的在于探索、优化骨缺损的修复策略,一方面通过探索优化骨组织工程种子细胞的移植策略,提高种子细胞移植后的存活,提出“分步式骨组织工程”的构建策略,并对其进行了初步研究;另一方面通过构建药物缓释体系和个体化的功能型支架材料,以期提高骨缺损修复的效率,为临床治疗提供新的思路。材料与方法胶原（collagen,Col）是细胞外基质的主要组成部分,具有良好的生物相容性和可降解性;我们以胶原为支
软骨缺损的修复一直是外科治疗领域的棘手问题。组织工程技术是解决软骨缺损难题的有效手段。骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal stem cells,BMSC）是重要的间充质干细胞,在构建组织工程软骨方面具有广阔的前景,优势显著。但构建的组织工程化软骨在植入皮下后,很容易发生骨化。在骨的发育学理论来看,血管内皮生长因子（vascular endothelial growth fac
目的为了更好的调控种子细胞的成骨分化及寻找合适的眼眶骨组织工程支架,本论文将研究miR-26a对人脂肪间充质干细胞（human adipose-derived stem cells,hADSCs）成骨分化的影响及调控机制,筛窦粘膜间充质干细胞（human ethmoid sinus mesenchymal stem cells,hESMSCs）膜片在骨修复中的作用,以及不同质量比的丝素（silk
目的:通过定量测量了解自然股骨滑车沟形态特点;探讨滑车沟轨迹形态与股骨髁尺寸、几何形状和解剖对线的关系;分析进口假体滑车沟设计是否符合生理特点。方法:纳入健康中国成年人男性和女性各50名,通过三维软件对股骨模型滑车沟形态进行分析。首先,从滑车沟近端向远端,绕滑车沟轴并间隔15°建立同轴切平面,在每个横截面处标记滑车沟最低点,根据点数据分析滑车沟轨迹形状、位置和偏转方向。其次,测量并分析轨迹形态与股
目的:探索骨组织工程技术在构建方式,移植策略上改良优化方法,以提高组织工程骨移植物构建效率,及种子细胞骨再生效率;以及研究在衰老,骨质疏松,糖尿病等病理状态下骨组织工程技术修复骨缺损的可行性,拓宽其临床适用范围,探索可能的改进策略,并延伸其实用价值。方法:1.使用脱钙骨基质DBM通过粉碎,过筛,冻干的方法制备微载体。将DBM微载体置入旋转搅拌式生物反应器中,与商用化微载体Cytodex3相对比,比
目的:观察脓毒症时大鼠膈肌神经肌肉接头处乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,ACh E）活性的变化并探讨其可能的机制。方法:第一部分:采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠急性脓毒症模型,术后24 h时测定0.1或0.5μmol/L新斯的明拮抗10μmol/L罗库溴铵所致膈肌单收缩张力抑制的时间效应曲线,同时用改良的Karnovsky和Roots法测定膈肌神经肌肉接头处ACh E的活性,实
目的:肌腱细胞体外扩增过程易导致其表型丧失,而文献报道体外高密度培养肌腱细胞可以维持其细胞表型,本研究探索高密度培养是否可以诱导真皮成纤维细胞向肌腱细胞转分化。方法:本实验分为两组,高密度实验组为每个10 cm培养皿接种2.5×106个细胞,低密度对照组为每个10 cm培养皿接种0.36×106个细胞。扩增细胞每隔4天传代,总共传4代。培养过程中分别于第4、8和16天三个时间点收集两组细胞样本进行
第一部分治疗结束18F-FDG PET/CT评估在HL与NHL中的预后价值目的:探讨HL和NHL中,Deauville标准（DC）和国际合作组织标准（IHPC）用于治疗结束18F-FDG PET/CT（pt PET）结果判读的预后价值。方法:84例经病理学证实的HL及NHL患者,治疗前及治疗结束后行PET/CT检查。PET/CT图像经IHPC和DC两种标准评估,DC评估中采用两种阳性阈值定义方法: