二烯丙基二硫作用于人白血病K562细胞后凋亡相关基因的差异表达

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目的研究二烯丙基二硫(Diallyl disulfide,DADS)作用于K562细胞后凋亡相关基因的差异表达,为进一步探讨DADS诱导K562细胞凋亡的分子机制提供基础。方法1.采用瑞士-吉姆萨染色和Hoechst33342染色观察40mg/LDADS作用K562细胞后不同时间(24h、48h、72h)段的细胞形态学变化。2.运用基因芯片技术检测40mg/LDADS作用K562细胞24h后凋亡相关基因的差异表达。3. RT-PCR法检测GADD45A和HO-1基因的mRNA表达变化,验证基因芯片结果的可靠性。结果1.瑞士-吉姆萨染色观察到40mg/L DADS作用K562细胞后具有典型的凋亡形态变化:细胞体积缩小,形态不规则,核/浆比例降低,甚至有“出芽”的现象。2. Hoechst33342染色观察到40mg/L DADS作用K562细胞后具有典型的凋亡形态变化:细胞核缩小,染色质浓缩、可见碎片,甚至有凋亡小体形成。3.40mg/L DADS作用K562细胞24h后共有369个差异表达基因,其中与凋亡相关的差异表达基因共有14个:上调的5个是GADD45A、HSPA1B、PACAP、AEN、TPT1,下调的9个是CDKN2D、NFKBIA、IL7、PPP1R13L、GCLM、DDLT4、HO-1、BNIP3L、BNIP3。4. RT-PCR技术检测GADD45A和HO-1基因mRNA表达情况:40mg/L DADS作用K562细胞24小时后,GADD45A基因表达较对照组上调,而HO-1基因表达下调,这与基因芯片结果一致。结论1.运用基因芯片技术,检测了二烯丙基二硫作用后K562细胞的基因表达谱变化,发现有14个凋亡相关差异表达基因,证明DADS诱导K562细胞凋亡是多个基因共同作用的结果。2. DADS诱导K562细胞的凋亡可能受GADD45A和HO-1基因的相关信号转导通路调节。
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