【摘 要】
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目的探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）对外周CD4+T细胞分化及功能的调控作用。方法选取6～8周龄的雄性Hdac3杂合基因缺失小鼠(Hdac3fl/flCD4cre+/-)及其野生型正常对照小鼠(Hdac3fl/flCD4cre-/-,WT),每组6～8只,分离脾脏和淋巴结,流式检测HDAC3缺失对外周CD4+和CD8+T细胞比例和数量的影响。分离小鼠脾细胞,在PMA和Ionomycin刺激条件
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目的探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）对外周CD4+T细胞分化及功能的调控作用。方法选取6～8周龄的雄性Hdac3杂合基因缺失小鼠(Hdac3fl/flCD4cre+/-)及其野生型正常对照小鼠(Hdac3fl/flCD4cre-/-,WT),每组6～8只,分离脾脏和淋巴结,流式检测HDAC3缺失对外周CD4+和CD8+T细胞比例和数量的影响。分离小鼠脾细胞,在PMA和Ionomycin刺激条件下培养5 h,离心收集细胞,分别采用抗小鼠IFN-γ、IL-4和IL-17A抗体细胞内染色检测HDAC3缺失对Th1、Th2和Th17效应性T细胞亚群产生的影响。采用抗小鼠CXCR5和PD-1抗体细胞表面染色检测HDAC3缺失对Tfh细胞产生的影响。采用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-4和IL-17的表达水平。流式分选小鼠外周初始CD4+T细胞,在抗CD3和抗CD28抗体活化基础上,分别采用Th1、Th2细胞分化培养条件体外培养72 h,流式检测HDAC3缺失对CD4+T细胞体外分化的影响。小鼠外周初始CD4+T细胞经活化培养24 h后,分别提取细胞总RNA,采用Microarray检测CD4+T细胞分化亚群相关基因表达变化。将HDAC3-si RNA转染至EL4细胞,q PCR检测HDAC3缺失对Tfh细胞特异性转录因子Bcl6表达的影响。采用HDAC3选择性抑制剂RGFP966处理C57BL/6小鼠,流式检测外周CD4+、CD8+T细胞和Tfh细胞变化。结果与WT小鼠相比,Hdac3fl/flCD4cre+/-小鼠脾脏和淋巴结中CD4+和CD8+T细胞比例和数量显著降低;脾脏CD4+T细胞中IFN-γ阳性细胞显著降低,而IL-4、IL-17A阳性细胞和Tfh细胞比例显著增加;血清中IFN-γ表达降低,而IL-4和IL-17表达显著增加。HDAC3缺失促进外周初始CD4+T细胞向Th2细胞分化,而抑制其向Th1细胞分化。Microarray结果表明HDAC3缺失导致活化CD4+T细胞中Th1相关基因表达显著降低,而Th2、Th17和Tfh相关基因表达显著增加。转染HDAC3-si RNA降低EL4细胞中HDAC3的表达但促进Bcl6的表达。RGFP966不影响小鼠外周CD4+和CD8+T细胞比例和数量,但导致Tfh细胞比例显著增加。结论HDAC3促进CD4+T细胞向Th1细胞分化,抑制CD4+T细胞向Th2、Th17和Tfh细胞分化,同时抑制Tfh细胞分化的关键转录因子Bcl6的表达。图13幅;表9个;参142篇。
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