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[研究背景]小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)是一种恶性程度极高的肿瘤,标准治疗手段为化疗,但患者往往容易对化疗药产生抗性,导致治疗失败,因此需要探索一种新的治疗策略。生物钟在调节细胞增殖和新陈代谢,影响疾病的发生发展中发挥着重要作用,尤其是与肿瘤的形成密切相关,药物干预肿瘤细胞的生物钟蛋白可能是治疗肿瘤的有效治疗方法。SR9009是REV-ERB蛋白(一种基本的生物钟组件)的特定合成靶向激动剂,有研究表明SR9009可以通过对生物钟蛋白REV-ERB的药理作用调节自噬过程从而杀伤神经胶质瘤等肿瘤,但具体分子调控机制尚未完全阐明,而该药物在小细胞肺癌(SCLC)中的抗肿瘤作用及机制还未有报道,值得进一步探究。[研究方法]1、利用化疗敏感细胞(H69和H446)以及相应的化疗耐药细胞(H69AR和H446DDP)来评估REV-ERB激动剂SR9009对小细胞肺癌细胞恶性生物学行为的影响,并进一步验证其在小细胞肺癌皮下成瘤模型中的抗肿瘤作用。2、采用免疫印迹实验(Western Blot)和实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技术验证SR9009能够激活REV-ERB蛋白,并进一步利用siRNA细胞转染技术在小细胞肺癌细胞中下调REV-ERBα,结合细胞毒实验来探究REV-ERB蛋白是否参与SR9009抗小细胞肺癌作用;通过染色质免疫沉淀(Chip)实验及高通量测序技术,明确SR9009靶蛋白REV-ERB的下游潜在调控基因。3、通过激光共聚焦、电镜、蛋白免疫印迹实验检测小细胞肺癌细胞的自噬水平,采用自噬抑制剂氯喹干预自噬以及调控自噬相关基因明确SR9009通过调节自噬发挥抗小细胞肺癌作用。[结果]本研究结果表明生物蛋白REV-ERB激动剂SR9009对小细胞肺癌化疗敏感细胞和化疗耐药细胞均具有显著的抗肿瘤作用;SR9009靶蛋白REV-ERBα在该过程中发挥主要作用;核心自噬基因ATG5在本研究中被鉴定为生物钟蛋白REV-ERBα的下游靶基因,直接与REV-ERBα蛋白相互作用;SR9009通过REV-ERBα蛋白负调控核心自噬基因ATG5抑制小细胞肺癌细胞自噬,这是SR9009对小细胞肺癌产生明显抗肿瘤作用的机制。[结论]综上所述,我们的研究证实SR9009对小细胞肺癌具有显著的抗肿瘤作用。SR9009激活生物钟蛋白REV-ERB,进而抑制核心自噬基因ATG5干预细胞自噬活动,从而对小细胞肺癌产生抗肿瘤作用。本研究表明REV-ERB激动剂SR9009可作为一种有效的治疗策略运用于在小细胞肺癌的治疗过程。