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急性脑梗死约占全部脑血管病的60%～80%,其具有高发病率、高致残率、高死亡率以及高复发率的特点。临床上常见火毒证、血瘀证、痰证等,而在发病3-5天以火毒证患者最为常见,火毒证临床症状多见面红目赤、口臭气促、痰黄、小便短赤、大便干燥、数脉等。急性脑梗死属于中医“中风病”范畴,临床上以火毒证较常见,其病机为火(热)之邪与瘀血相激相助、火热夹瘀损坏形体而致病,可出现热势不解、昏瞀等症状,甚则病情险恶、危及生命。本实验以“毒损脑络”为理论依据,针对临床上常见的急性脑梗死火毒证,建立急性脑梗死火毒证病证结合模型,由急性脑梗死瀑布式级联反应中的关键环节——炎症反应NF-κB信号通路切入,以“清热解毒、活血通络”为治疗原则,选用苦碟子注射液和注射用血栓通联合治疗,明确清热活血治法对急性脑梗死火毒证的协同增效作用,探究对急性脑梗死火毒证炎症反应NF-κB信号通路的调控作用机制。目的:建立大鼠急性脑梗死火毒证病证结合模型,明确“清热活血”治疗急性脑梗死火毒证的协同增效作用,探究对急性脑梗死火毒证炎症反应NF-κB信号通路的调控作用机制,为临床治疗急性脑梗死火毒证提供实验依据。方法:采用腹腔注射角叉菜胶以及线栓法致大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)的方法建立急性脑梗死火毒证模型,SD大鼠随机分为正常组(Naitive,N)、假手术组(Sham,S)、脑缺血模型组(Ischemia 1.5 h/Reperfusion 72h,I)、苦碟子注射液治疗组(Kudiezi injection treatment,group A)、血栓通注射液治疗组(Xueshuantong treatment,group B)、苦碟子注射液(1.8ml/Kg)+血栓通注射液(20mg/Kg)治疗组(group C)、苦碟子注射液(1.8 ml/Kg)+血栓通注射液(80mg/Kg)治疗组(group D)、苦碟子注射液(7.2 ml/Kg)+血栓通注射液(20mg/Kg)治疗组(group E),共八组。通过TTC染色观测各组大鼠脑梗死率变化;通过苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色法观察梗死区域及周围形态学变化;Western Blot方法检测梗死侧大脑皮层中NF-κBp65及IKKβ的蛋白表达情况;采用Real time-PCR方法检测梗死侧大脑皮层中NF-κB p65及IKKβ mRNA的表达情况。所得数据用Excel软件处理,结果以(?)±S表示,应用SPSS17.0软件进行单因素方差(one-way ANOVA)分析。结果:1.各中药治疗组大鼠脑梗死率较模型组均降低(P<0.05),其中清热活血组分组的脑梗死率较模型组有显著改善(P<0.01)。三个组分组较苦碟子组和血栓通组无明显差别。2.在HE染色中:正常组大鼠脑组织形态结构完整,皮层区神经细胞数目多、排列整齐密集;胞浆丰富淡染,核膜清晰、核仁明显。假手术组与正常组类似,神经细胞形态正常。模型组大鼠大脑组织非缺血侧细胞形态结构同正常组;缺血侧脑组织神经细胞数目减少,细胞间隙增宽,细胞水肿,胞浆浓缩红染,部分胞核深染、皱缩并偏位,核仁难见。各给药组形态均有不同程度改善,其中以三个组分组改善程度最大。3.模型组与正常组相比,其NF-κB p65、IKKβ蛋白均呈高表达(P<0.01),而各个给药组NF-κB p65、IKKβ蛋白表达较模型组有所下降。C、E组大鼠患侧大脑皮层中NF-κB p65蛋白表达较模型组明显下降(P<0.01);而苦碟子治疗组和血栓通治疗组NF-κB p65蛋白表达虽然较模型组有所减少(P<0.05),但相对C组、E组下降不明显。三个清热活血组与苦碟子治疗组、血栓通治疗组相比较NF-κB p65的蛋白表达无统计学意义(P>0.05)。C、D、E组较苦碟治疗组IKKβ蛋白表达下降较明显(P<0.01)。另外,三个清热活血组分组IKKβ的蛋白表达较血栓通组有统计学意义(P<0.01);C、E组较苦碟子治疗组IKKβ蛋白表达亦有统计学意义(P<0.01)。4.模型组NF-κBp65、IKKβmRNA的表达均较正常组上调,正常组的表达仅为模型组的0.37、0.48倍。各给药组NF-κB(p65)、IKKβmRNA表达均较模型组降低,其中组分D组NF-κBp65、IKKβmRNA的表达较模型组有差异(P<0.05);E组IKKβmRNA的表达较模型组有差异(P<0.05);而E组NF-κBp65 mRNA的表达较模型组有明显差异(P<0.01)。结论:1.急性脑梗死发生后,脑组织损伤较严重,体现在神经功能缺损、脑组织和神经细胞的形态结构改变以及可见梗死灶方面。2.清热活血组分联合治疗对急性脑梗死火毒证具有协同增效的作用。3.清热活血组分可通过抑制急性脑梗死炎症反应NF-κB信号通路中的关键因子IKKβ、NF-κB p65基因和蛋白的表达发挥对急性脑梗死的治疗作用。