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目的本课题组前期研究首次发现,抑癌基因wwox在鼻咽癌组织中表达降低,且随患者病情进展而逐步下降,并与淋巴结转移相关,提示抑癌基因wwox与鼻咽癌的发生发展有关。鼻咽癌与EB病毒(EBV)感染密切相关,而AKT/mTOR信号通路被视为癌细胞存活的首要通路,本研究以EBV的主要致癌基因LMP1为切入点,初步探讨EBV主要致癌基因LMP1是否通过AKT/mTOR信号通路调控抑癌基因WWOX的表达。方法1.LMP分别与AKT/mTOR通路、抑癌基因WWOX关系的研究应用Western blot、qPCR检测鼻咽癌细胞株CNE1和CNE1-LMP1 AKT/mTOR通路(Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K)以及WWOX的表达情况,探讨LMP1与/AKT/mTOR通路和WWOX的关系。2.初步验证LMP1通过AKT/mTOR通路调控WWOX表达的研究以AKT/mTOR信号通路靶向抑制剂(雷帕霉素)抑制CNE1-LMP1细胞株,Western blot、qPCR检测抑制前后VKT/mTOR通路重要表达蛋白(Akt、 p-Akt、p70S6K和p-p70S6K)、WWOX的表达情况,初步验证LMP1通过AKT/mTOR通路调控WWOX表达。结果1.LMP分别与AKT/mTOR通路、抑癌基因WWOX关系的研究LMP1与WWOX基因mRNA、蛋白表达情况的研究：在CNE1-LMP1细胞中,wwox基因mRNA、蛋白的表达水平较CNE1细胞均下降,P分别为0.025,0.002,有统计学意义,提示LMP1与WWOX表达相关。LMP1与AKT/mTOR信号通路关键蛋白表达情况的研究：在鼻咽癌细胞株CNE1与CNE1-LMP1的比较中,AKT/mTOR通路中关键蛋白Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K表达的各P值分别为0.075,0.008,0.124,0.034,其中Akt、p70S6K在CNE1与CNE1-LMP1中的蛋白差异表达不存在统计学差异,而p-Akt、p-p70S6K在CNE1-LMP1中表达水平高于CNE1,差异具有统计学意义,提示AKT/mTOR信号通路受LMP1调控。2.初步验证LMP1通过AKT/mTOR通路调控WWOX表达的研究使用通路靶向抑制剂(雷帕霉素)抑制CNE1-LMP1细胞株后,WWOX基因mRNA、蛋白的表达水平均升高,P值分别为0.036,0.044,提示AKT/mTOR信号通路调控WWOX基因表达。另外,AKT/mTOR信号通路的关键蛋白Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K在药物抑制处理前后的差异表达中,各P值分别为0.136,0.354,0.103,0.045,其中Akt、p-Akt、p70S6K在抑制处理前后的蛋白差异表达不存在统计学差异,p-Akt作为雷帕霉素作用靶点的上游,用药以后表达亦不存在统计学差异,而p-p70S6K在抑制处理CNE1-LMP1细胞以后的表达水平低于用药处理前,且差异具有统计学意义,说明了雷帕霉素抑制AKT/mTOR通路的蛋白表达。结论1.WWOX基因在CNE1-LMP1细胞株的表达较CNE1细胞株下降,它可能受EBV癌基因LMP1的调控。2. LMP1可调控AKT/mTOR信号通路及其下游基因表达。3. WWOX基因表达下降可能与LMP1通过AKT/mTOR信号通路调控有关。