背景与目的:心肌肥大是对血流动力学应激的一种适应性反应,被认为具有增强心脏性能、降低心室壁张力和耗氧量的代偿作用。然而,长期的心肌肥大会增加心血管疾病的发病率,同时心肌肥大也被认为是晚期心衰的初始危险因素,是世界范围内心衰死亡的主要原因,还是因致命性心律失常导致猝死的独立危险因素。所以预防心肌肥大的发展对减少心血管事件的发生至关重要。近年研究发现,蛋白质的翻译后修饰是心脏疾病发生发展过程中的重要调控机制并引起广大学者的高度重视,而CBL（Casitas B cell lymphoma）作为一种降解底物蛋白的泛素连接酶随之进入了我们的视野。有报道CBL参与心肌细胞损伤和心脏修复过程。我们前期研究发现Ang Ⅱ促心肌细胞肥大时,CBL表达升高,因此推测CBL可能与心肌肥大相关,但其机制尚不清楚。本研究将探讨CBL与心肌肥大的关系,并探讨CBL调控心肌肥大的机制,为临床预防心肌肥大提供新思路。材料与方法:1.Ang Ⅱ促心肌肥大动物模型和细胞模型构建1.1心肌肥大动物模型构建:选取6-8周龄雄性C57BL/6小鼠通过皮下植入药物微量泵,持续泵入Ang Ⅱ（1μg/kg/min）4周以诱导心肌肥大。并通过用彩色多普勒超声检测心肌肥大程度,其次再对小鼠心脏组织进行麦胚凝集素（WGA）染色和Mansson染色评估小鼠心肌肥大程度,并使用Western-blot、qRT-PCR检测心肌肥大标记物（ANP,β-MHC）蛋白及m RNA表达水平再次验证动物心肌肥大模型构建成功。1.2心肌肥大细胞模型构建:选用H9c2细胞株,用Ang Ⅱ（1μM）处理48小时以诱导细胞肥大。并通过同前方法检测心肌肥大标记物（ANP,β-MHC）表达水平、鬼笔环肽染色分析观察细胞形态学变化确定心肌肥大细胞模型构建成功。1.3使用Western-blot、qRT-PCR分别检测CBL在肥大的小鼠心脏中及肥大的H9c2细胞中的表达水平。2.CBL在Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大中的作用2.1采用CBL-Si RNA的干扰片段及过表达质粒转染H9c2细胞,干扰CBL在细胞中表达,Western-blot、qRT-PCR检测CBL表达变化。2.2用Ang Ⅱ（1μM,48小时）诱导干扰片段及过表达质粒转染后的H9c2细胞肥大。2.3 Western-blot、qRT-PCR检测心肌肥大标记物（ANP,β-MHC）表达水平、鬼笔环肽染色分析观察细胞形态学变化确定CBL在Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大中的作用。3.CBL促Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的机制3.1通过Ubibrowser网站对CBL的互作蛋白进行预测,筛选出下游蛋白VHL,并验证其在Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的调控作用。3.2对H9c2细胞转染VHL的干扰片段及过表达质粒进行回复实验,通过Western-blot、qRT-PCR检测心肌肥大标记物（ANP,β-MHC）表达水平、鬼笔环肽染色分析观察细胞形态学变化,确定CBL通过调控VHL在Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大中起作用。3.3为探索CBL调控VHL的作用机制,通过MG132和氯喹加药处理证明VHL通过泛素化降解,免疫共沉淀证实CBL与VHL的直接结合,并且通过加测泛素化水平证明CBL促进VHL泛素化降解影响Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。结果:（1）在心肌肥大动物模型和细胞模型中,CBL均是高表达。（2）抑制CBL表达,AngⅡ诱导的心肌细胞肥大受到抑制;过表达CBL,AngⅡ诱导的心肌细胞肥大受到促进;证实CBL的存在可以促进心肌肥大发展。（3）验证CBL是通过调控VHL的表达影响心肌细胞肥大时,发现抑制CBL的表达,VHL表达增加;过表达CBL,VHL表达下降。干扰VHL表达探讨VHL在心肌肥大中的作用发现:抑制VHL表达,AngⅡ诱导的心肌细胞肥大受到促进;过表达VHL,AngⅡ诱导的心肌细胞肥大受到抑制;证实VHL可以抑制心肌肥大发展。（4）当使用蛋白酶体抑制剂后VHL的表达随时间延长而增加,证实VHL是通过泛素化蛋白酶体途径进行降解。而当干扰CBL表达,VHL降解速率减慢,过表达CBL,VHL的泛素化水平明显增加。CO-IP实验显示CBL与VHL存在相互结合,且CBL由VHL沉淀;这表明CBL可以通过加速VHL蛋白的泛素化降解VHL蛋白,从而促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。结论:（1）CBL在AngⅡ诱导的肥大的小鼠心脏组织和肥大的心肌细胞中表达显著上调;（2）CBL可以促进AngⅡ诱导心肌细胞肥大;（3）CBL可以通过加速VHL蛋白的泛素化降解VHL蛋白,从而促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。