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白斑综合症病毒（white spot syndrome virus，WSSV）是危害水产养殖业的高致病病原体。1992年白斑综合症病毒首次在中国台湾爆发，而后分别在日本、东南亚、北美等国家和地区爆发，造成虾大面积死亡，对水产养殖业造成了巨大的经济损失。各国研究学者不断探索防治WSSV感染的方法和措施，但是到目前为止还没有实际可行的防治方法问世。Tat蛋白是HIV-1的转录激活因子，研究发现该蛋白结构域中包含一个11个氨基酸序列的短肽，该短肽能够介导外源物质进入多种细胞或组织中，将其称为蛋白转导域TAT。蛋白转导域TAT作为转运载体已在哺乳动物细胞、昆虫细胞、小鼠中进行了广泛研究，但目前还未见其用于甲壳类动物——克氏螯虾。在本研究中构建重组质粒pET-28a-VP28; pET-28a-TAT-VP28;pET-28a-VP28-EGFP； pET-28a-TAT-VP28-EGFP，将上述质粒转化到基因工程表达菌株E.coli BL21(DE3)中，诱导表达目的蛋白。将纯化后的VP28-EGFP与TAT-VP28-EGFP融合蛋白喂食克氏螯虾，采用流式细胞术的方法证实，蛋白转导域TAT能够携带与其融合的外源蛋白穿过克氏鳌虾肠壁组织到达血淋巴中；通过荧光免疫组化方法证实TAT-VP28-EGFP融合蛋白存在于克氏螯虾中肠，肌肉和心脏等组织中。克氏螯虾分别免疫VP28，TAT-VP28蛋白质亚单位疫苗后，测定了血淋巴中酚氧化酶（PO）和超氧化物歧化酶（SOD）酶活力变化。实验结果表明克氏螯虾免疫TAT-VP28蛋白2小时后，血淋巴中的PO及SOD酶酶活均有显著提高；而克氏螯虾免疫VP28蛋白后的血淋巴中PO酶酶活没有变化，24小时后SOD酶酶活有一定提高。这一结果再次证实了TAT-VP28进入克氏螯虾血淋巴后，可以引发克氏螯虾体内的免疫反应。为了研究蛋白质亚单位疫苗的免疫效果，将VP28，TAT-VP28蛋白包被饲料后，以口服的方式、100μg/只的日剂量免疫克氏螯虾。分别连续免疫7天和14天后，进行病毒攻击实验。实验结果表明与阳性对照组在10天内达到90%以上的死亡率相比，TAT-VP28，VP28组其死亡率分别为43.3%、36.7%；60%、50.0%。为了研究蛋白质亚单位疫苗的免疫时效性。克氏螯虾连续免疫VP28，TAT-VP28蛋白14天，在免疫后的第3和7天分别进行病毒攻击进行病毒攻击实验。实验结果表明与阳性对照组在10天内达到90%以上的死亡率相比，TAT-VP28，VP28组其死亡率分别为43.3%、53.3%%；60%、66.7%。本研究首次报道和证实以克氏螯虾作为动物模型，VP28蛋白在蛋白转导域TAT介导下能够穿过虾肠壁组织到达血淋巴中。使亚单位疫苗能不通过肌肉注射的方式直接进入血淋巴中，通过血淋巴在虾体内的循环，使其到达到不同的组织中，同时也增强了虾血淋巴中酚氧化酶和超氧化物歧化酶酶活，从而增强克氏螯虾的免疫防御体系。该研究为预防和控制白斑综合症病毒提供了一种实际可行的新思路。鱼类生长激素(fish growth hormone, fGH)是由鱼类脑垂体合成并分泌的一种蛋白多肽。鱼类生长激素参与蛋白质合成和脂类代谢等生理功能，能够提高鱼类的生长速率，在水产养殖业中具有着重要的研究意义和应用价值。2008年研究学者将罗非鱼生长激素基因构建在真核表达载体中，通过胚胎电穿孔方法，将上述质粒转入到南方滨对虾胚胎受精卵中，与对照组比较幼虾的平均体重有32%的增加。减毒的鼠伤寒沙门氏菌作为DNA疫苗转运载体目前已经在鼠、雏鸡、鱼和克氏螯虾等体内得到广泛研究和应用，本研究首次将对虾抗菌肽Penaeidin-2信号肽与鲤鱼生长激素基因融合，将其构建到真核表达载体pcDNA3.1-中。用脂质体法将该质粒转染COS-7细胞，用RT-PCR和Western blot的方法证实SGH在人巨细胞病毒(CMV)启动子的控制下在COS-7细胞中得到了高效表达。克氏螯虾幼虾分别注射50μg pcDNA3.1-和pcDNA3.1-SGH后的第3，7，14和21天，实时荧光定量PCR方法检测克氏螯虾血淋巴中Astacidin; Chymotryspin和Trypsin三种酶mRNA表达水平的变化。与对照组pcDNA3.1-比较，pcDNA3.1-SGH组血淋巴中Astacidin; Chymotryspin和Trypsin三种酶的转录水平显著上升。分别将50μg pcDNA3.1-, pcDNA3.1-SGH肌肉注射免疫克氏螯虾幼虾后，与对照组比较，在25天内克氏螯虾幼虾平均体重增加了22.2%以上。将重组质粒pcDNA3.1-SGH和质粒pcDNA3.1-通过电转的方法转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SV4089中，重组菌分别命名为SV/pcDNA3.1-SGH和SV/pcDNA3.1-。将重组菌SV/pcDNA3.1-SGH和重组菌SV/pcDNA3.1-包被饲料后，以109CFU/只日剂量连续喂食克氏螯虾幼虾十天。为了研究减毒鼠伤寒沙门氏菌SV4089能否有效携带DNA质粒到克氏螯虾幼虾体内，分别在免疫后的第1、3、7、10和14天，分别从克氏螯虾幼虾体内收集血淋巴、游泳足、腮、心脏、肝胰腺和尾肌等不同的组织，提取总RNA，结果在以上组织中检测到了gh的转录。将重组菌SV/pcDNA3.1-SGH和重组菌SV/pcDNA3.1-包被饲料后，以109CFU/只日剂量连续喂食克氏螯虾幼虾十天后，在免疫后的一个月内克氏螯虾幼虾体重增加了21%以上。本研究首次报道了生长激素口服DNA疫苗促进克氏螯虾幼虾生长，证实了减毒鼠伤寒沙门氏菌SV4089能够将质粒DNA运送到克氏螯虾幼虾体内。这项研究为促进甲壳类动物——克氏螯虾生长提供了一种新思路。