论文部分内容阅读
水稻是一种世界性的重要粮食作物,是我国近50％食粮的来源.水稻生长季节受多种胁迫因素的影响,其中冷害是影响水稻单产的主要因子之一,培育抗冷水稻品种是生产实践的迫切需要.本实验研究了籼稻再生组培体系、农杆菌介导的转化体系中影响基因转化效率的几个因素,为籼稻转化效率的提高提供了依据.应用根癌农杆菌介导遗传转化法,将带有细胞分裂素合成代谢的关键酶基因(ipt)与抗除草剂基因(bar)构建成融合基因表达载体,通过农杆菌(EHA105/pBinbaript)介导转化粳稻品种EY105、籼稻品种CDR22、DUOXI1、K17B的愈伤组织和成熟胚,获得PCR检测为阳性的转基因植株(EY105)和CDR22表型变化的植株,为进一步鉴定筛选抗低温的转基因种质资源和育种新材料奠定基础.主要研究结果如下:1、水稻成熟胚愈伤组织的诱导及分化研究以CDR22、K17B、DUOXI Ⅰ等籼稻品种为材料,研究了不同培养基等因素对愈伤组织诱导、分化和再生的影响.结果表明,采用DNB(N<,6>盐+B<,5>维生素+水解酪蛋白500mgL<-1>+脯氨酸500mg L<-1>+谷氨酰胺300mg L<-1>+甘露醇36.4gL<-1>+蔗糖30gL<-1>+2,4-D 2mg L<-1>+0.2 mg L<-1>6-BA+植物凝胶2.5g L<-1>,pH 5.8)为诱导培养基,DMS(MS+水解酪蛋白500mgL<-1>+脯氨酸500mgL<-1>+谷氨酰胺300mg L<-1>+甘露醇36.4gL<-1>+蔗糖30g L<-1>+2,4-D 2mg L<-1>+0.2 mgL<-1>6-BA+植物凝胶2.5gL<-1>,pH 5.8)与DNB培养基交替继代,籼稻愈伤组织诱导率高、质量较好;采用MSR<,3>(MS+水解酪蛋白500mg L<-1>+谷氨酰胺300mg L<-1>+脯氨酸500mg L<-1>+甘露醇36.4g L<-1>+麦芽糖30g L<-1>+TDZ0.2mg L<-1>+植物凝胶5gL<-1>pH5.8)为分化培养基,愈伤组织分化率可达90％,较对照MSR1提高3~5倍.2、受体材料对除草剂本底抗性的测试将愈伤组织分别接种到含不同浓度Glufosinate ammoniun的筛选培养基上,测试其对愈伤组织抑制效果.结果表明,Glufosinate ammoniun对愈伤组织的选择压以4 mgL<-1>为适宜.3、农杆菌介导水稻遗传转化条件的研究通过AS、菌液浓度、共培养时间等因素对转化的影响实验,初步确定了愈伤组织筛选及分化培养基附加除草剂(Glufosinate ammoniun)4 mgL<-1>、头孢霉素300mgL<-1>、愈伤组织预培养时间为2~3天、共培养基中加入乙酰丁香酮的浓度为39 mgL<-1>、共培养2~3天、菌液OD<,600>为0.5.4、转化植株的获得及PCR检测转化ipt基因所得的除草剂抗性再生植株中,获得ipt的PCR检测阳性植株1株;另一途径采用成熟胚直接感染,经过愈伤诱导、除草剂筛选,得到1株表型变化的植株.