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目的：纯化原核表达的重组人颗粒溶素(GNLY),并制备其单克隆抗体(mAb),为GNLY相关疾病的诊断提供一种新指标。方法：Ni离子亲和层析法纯化重组人GNLY,用其免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备相应mAb。间接ELISA法测杂交瘤细胞培养上清和腹水mAb的效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸盐洗脱法测定相对亲和力指数,并行Ig亚类、特异性及杂交瘤细胞分泌mAb的稳定性检测。结果：纯化的重组GNLY融合蛋白,其纯度和含量分别为95%和0.8g/L。共筛选出能稳定分泌抗人GNLY mAb的杂交瘤细胞4株,分别命名为5E5、5G7、6C8和9C6。4株杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价分别为1：100-1：3200和(0.2-8)×10-4。5E5杂交瘤细胞株分泌mAb的Ig亚类为IgM,其余3株mAb为IgG1。4株杂交瘤细胞体外连续培养2个月及液氮冻存6个月后复苏,分泌mAb的水平仍能达到之前的水平。4株mAb的相对亲和力指数为1.5-3.0mol/L；5G7、6C8和9C63株杂交瘤细胞株分泌mAb的相加指数(AI)＜50%,而5E5分泌mAb与上述3株细胞分泌mAb的AI＞50%。4株纯化后的mAb与GNLY抗原有较高的吸光度值,而与其他包被的抗原不反应。结论：利用Ni离子亲和层析法获得可溶性重组GNLY;通过杂交瘤技术,获得4株能分泌特异性强、效价高的GNLY mAb杂交瘤细胞株。