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目的:建立联合肝脏分隔和门静脉结扎的分阶段肝切除术(ALPPS)大鼠模型,探讨联合肝脏分隔和门静脉结扎术对大鼠肝脏肝再生的影响。方法:SPF级健康清洁成年雄性SD大鼠75只,6-8周龄,体重230-280g,采用随机数字表法将大鼠随机分为3组,即假手术组(S组)、单纯门静脉结扎组(PVL组)和联合肝脏分隔和门静脉结扎组(ALPPS组),每组25只。PVL组:大鼠术前禁食8h,自由饮水,采用水合氯醛(0.6ml/100g)腹腔注射麻醉,在动物手术灯下分别游离各叶肝动脉、肝胆管及门静脉分支以避免损伤,采用5/0丝线选择性结扎大鼠肝左叶,左中叶,乳突叶,右叶门静脉分支,保留肝右中叶门静脉分支;ALPPS组:除上述步骤外,当左叶及左中叶门静脉主干结扎后,左右中叶间(镰状韧带右侧)出现缺血线,沿着缺血线离断肝实质,采用8-0尼龙缝线沿缺血线结扎左右肝实质后,显微剪刀剪断左右部分,一步一步离断肝实质,直至左右肝中叶间肝实质完全离断,离断过程中断面小血管分支采用8-0尼龙线结扎止血或电凝止血,最后,肝左中叶断面采用无菌塑料薄膜包裹,以防止术后断面粘连;S组:仅行开关腹及肝周游离。各组分别于术后1d、3d、7d、10d、14d分别麻醉处死5只大鼠,收集各时间点静脉血4ml,3000转离心10min后,取上层血清-80℃保存备检。切取右中肝叶,称取质量后部分肝组织24 h内行石蜡包埋,部分肝组织经液氮速冻后放置于-80℃保存。测定术后各时间点肝右中叶质量,并计算肝再生率。检测血清肝功能指标血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及血清白蛋白(Alb)、总胆红素(TBil)水平,采用ELISA试剂盒检测血清中IL-6、HGF及VEGF的表达水平。采用real-time PCR检测术后各时间点肝右中叶组织中IL-6、HGF、TNF-α及TGF-βmRNA的表达水平,剩余肝组织应用石蜡切片HE染色及免疫组化测定肝组织PCNA的表达水平。结果:1.术后所有大鼠均存活,活动、精神及食欲良好。切口愈合良好,无感染等并发症发生。2.ALPPS组和PVL组术后各时间右中叶重量均明显增大,肝再生率均明显高于S组。与PVL组相比,ALPPS组术后第3d、7d、10d、14d右中叶再生明显,差异有统计学意义(P<0.05)。3.与S组相比,ALPPS组和PVL组术后第1d、3d血清ALT、AST浓度均明显增高(P<0.05)。术后第1d,ALPPS组血清ALT、AST浓度明显高于PVL组(P<0.05),随后均逐渐下降,术后第7d逐渐恢复至正常水平。术后第1、3天ALPPS组和PVL组血清Alb浓度明显低于S组,且ALPPS组血清Alb浓度明显低于PVL组(P<0.05)。三组术后血清TBil浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。4.与S组相比,ALPPS组和PVL组术后第1d、3d血清IL-6、HGF及VEGF的表达水平明显增高(P<0.05),且术后第1d、3d,ALPPS组血清中IL-6、HGF及VEGF的表达水平明显高于PVL组(P<0.05),两组随后均逐渐下降,术后第7d逐渐恢复至正常水平。5.与S组相比,PVL组和ALPPS组术后1d、3d的IL-6、HGF、TNF-α及TGF-βmRNA表达均上调(P<0.05),且术后第1d达到峰值,随后均降低。ALPPS组术后1d、3d各因子mRNA表达水平均明显高于PVL组(P<0.05)。6.PVL组和ALPPS组术后第1d前PCNA阳性表达保持低表达水平,差异无统计学差异,之后逐渐增高,于术后第3d达高峰,且ALPPS组PCNA阳性表达明显高于PVL组,差异有统计学意义(P<0.05)。7.光镜下ALPPS组术后1d左中叶出现肝索结构紊乱、肝细胞气球样变性水肿、脂肪变、窦周隙变窄,淤血、肝叶多处灶状坏死。而PVL组术后1d出现肝细胞肿胀、气球及空泡样变性、窦周隙变窄、无结构紊乱,与ALPPS组比较坏死区域较小。两组术后第3d细胞形态及肝索结构、淤血及坏死均较前一天减轻结论:1.本实验成功建立ALPPS术式大鼠模型,且证实ALPPS术后早期肝脏损伤加重,剩余肝体积再生加速。2.联合肝脏分隔和门静脉结扎术促进肝再生机制可能与肝实质的分隔造成的肝脏炎症反应和应激反应有关,促使某些细胞因子表达增高,尤其是IL-6、HGF、TNF-α和VEGF等。