拟南芥染色质重塑复合体IN080及其亚基肌动蛋白相关蛋白ARP5的功能研究

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染色质重塑因子是一类重要的表观遗传学调控因子,它们依赖ATP水解释放的能量,以蛋白质复合体的形式对染色质结构动态调控。INO80(Inositol auxotroph 80)是其中一类因子。IN080蛋白在进化上保守,从酵母到人类都已发现其同源物的存在。在这些物种中,IN080复合体是多种DNA代谢途径中的重要调控元件,然而对于植物中IN080蛋白功能的了解目前还很少。我们实验室之前鉴定了拟南芥IN080两个T-DNA插入突变体。ino80突变体呈现多种发育上的表型,包括植株矮化变小。针对这一表型,我通过相差干涉显微细致观测了莲座叶叶片,发现ino80叶片的表皮细胞和栅栏组织细胞面积减小,细胞数目下降。然而RT-PCR检测显示,细胞周期相关基因的表达在突变体中并没有发生明显改变。基因芯片分析表明,ino80突变体中表达发生显著性改变的基因主要集中在应答胁迫和防御相关基因。进一步的分析表明ino80突变体中表达发生改变的基因中与基因内部有H2A.Z富集的基因有明显的交集,暗示着受IN080调控的基因可能与H2A.Z有关。ino80突变体对基因毒试剂处理更为敏感,同时体内更容易产生DNA损伤,表明ino80突变体基因组稳定性存在缺陷。在酵母和动物中,ARP5是IN080蛋白复合体保守的组成亚基。我们的分子与遗传分析表明拟南芥ARP5与IN080相结合。已有的报道显示αrp5缺失突变体叶片表现出气孔增多的表型,但分子机制不明确。SPCH和MUTE是正向调控气孔发育的bHLH转录因子,RT-PCR分析显示其转录水平在αrp5突变体背景下特异性地上调。Pull-down实验表明ARP5可以在体外特异性地结合组蛋白变异体H2A.Z。此外,H2A.Z而非H3在SPCH和MUTE编码区的富集依赖ARP5的功能,表明拟南芥ARP5可能通过特异性地调控H2A.Z染色质上的分布影响SPCH和MUTE的转录水平。我们的结果表明拟南芥中可能存在保守的IN080复合体,其成员ARP5可能通过调控H2A.Z的染色质分布影响特定基因的表达。
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