目的:研究红景天苷(salidroside)对大鼠睾丸间质细胞、吊尾应激小鼠睾酮分泌的影响,考察不同剂量红景天苷在大鼠体内的动力学过程。方法:(1)将雄性大鼠断头处死后,立即摘取睾丸,剥离包膜,用Ⅱ型胶原酶消化。取睾丸间质细胞混悬液或含垂体组织块间质细胞悬液分别加入不同浓度的红景天苷(终浓度10-4、10-5、10-6和10-7 mol/L)或/和氢化可的松(终浓度10-6 mol/L)体外培养3h,用放免法(RIA)测定培养基中睾酮含量;(2)昆明种小鼠60只,随机分为对照组、应激组、红景天苷高剂量组(ig. 60mg/kg)、中剂量组(ig. 30mg/kg)和低剂量组(ig. 15mg/kg)。采用悬吊应激模型,除对照组外各组小鼠连续重复悬吊应激11d,每天应激一次,并循序增加应激强度,每次应激前30min给予相应剂量的红景天苷或生理盐水,并于末次应激结束30min后眼眶取血,用RIA测定血清中睾酮含量。摘取脾脏、胸腺、肾上腺和睾丸,称重并计算脏器指数,其中小鼠左侧肾上腺和睾丸用4%多聚甲醛固定并制作组织切片,HE染色,于显微镜下观察形态学变化;(3)健康雄性SD大鼠尾静脉注射不同剂量红景天苷(15、30、60mg/kg)后,按规定时间从眼眶静脉丛取血0.50ml,离心取血清用高氯酸沉淀蛋白,取上清液进行HPLC测定。色谱条件:色谱柱为VP-ODS柱SHIMADZU C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(10:90:0.011:0.016,V:V:V:V),流速为1.5ml/min,紫外检测波长为277nm,柱温50℃,进样量10μl,内标:咖啡因。并对所建立的方法进行方法学确证。测得的红景天苷峰面积用标准曲线换算成血药浓度,绘制不同给药剂量下红景天苷的血药浓度-时间曲线图,并用3P97药物动力学程序计算药物在大鼠体内的动力学参数。结果:(1)体外研究结果表明,间质细胞用含1%乙醇的DMEM培养基孵育时,乙醇对睾酮的分泌无影响;各个浓度的红景天苷均能显著刺激间质细胞睾酮的基础分泌,各个浓度的红景天苷对睾酮分泌的影响无浓度依赖关系;浓度为10-5和10-6mol/L的氢化可的松均可促进间质细胞的基础睾酮分泌,但睾酮分泌水平无显著性差异;间质细胞经红景天苷预处理后,再加入氢化可的松共培养时,间质细胞睾酮分泌增加,但是与单用红景天苷相比,睾酮分泌水平无差异;间质细胞与垂体共培养后间质细胞睾酮基础分泌显著增加,加入不同浓度红景天苷后对睾酮分泌没有显著影响;垂体和间质细胞共培养条件下氢化可的松可显著抑制间质细胞睾酮的分泌,但细胞经红景天苷预处理后可显著逆转氢化可的松所引起的睾酮分泌下降。(2)在体研究显示,应激后小鼠体重增长程度明显受抑,脾脏指数下降,肾上腺指数上升,肾上腺皮质肥厚,髓质萎缩甚至消失,且应激组小鼠血浆睾酮水平显著低于对照组。实验发现每次应激前30min给予低剂量红景天苷可使应激导致的体重增加减缓、肾上腺指数上升、肾上腺皮质肥厚及髓质萎缩等病理性改变减轻,睾酮恢复至正常水平。但红景天苷中剂量组和高剂量组上述作用不显著。(3)高效液相色谱法测定红景天苷的标准曲线方程:A样/A标=0.1041C+0.0924(r=0.9991,n=7),红景天苷浓度在0.50～80.00μg/ml内线性关系良好,以信号/噪音=3:1计算,红景天苷的最低检测浓度为0.15μg/ml,其中浓度为5、20、80μg/ml血清样品的日内精密度分别4.82%、1.84%和1.70%,日间精密度分别为4.15%、1.83%和1.54%,血清样品的平均回收率为(98.54±4.12)%。所得血药浓度-时间数据经3P97药物动力学程序处理,根据药动学房室模型的判断方法,初步判定静脉注射后红景天苷在体内大鼠的过程符合二室模型。低、中、高剂量下红景天苷的分布半衰期(T1/2α)分别为4.96、2.01和4.36min,消除半衰期(T1/2β)分别为24.24、19.40和16.88min。AUC0-t和AUC0-∞随着剂量的增加均呈线性增加,其中AUC0-t和AUC0-∞分别为362.15、879.77、1421.48和383.09、884.52、1426.63μg·min/ml。结论:(1)氢化可的松可显著抑制垂体存在条件下间质细胞睾酮的分泌,提示应激所产生的高水平的GCs可能通过影响垂体促性腺激素如LH等的释放对间质细胞睾酮水平产生影响。红景天苷可促进间质细胞的基础睾酮分泌,且该作用不受氢化可的松影响;在垂体与睾丸间质细胞共孵育条件下,红景天苷对垂体刺激下间质细胞睾酮的分泌无影响;而当间质细胞用红景天苷预培养30min后再加入氢化可的松时,培养基中睾酮水平上升,提示红景天苷与垂体所分泌的促性腺激素无协同作用,且红景天苷可拮抗氢化可的松所引起的睾酮水平的下降,该作用可能是通过竞争性拮抗糖皮质激素或者同时增强11β-HSD活性从而加速糖皮质激素分解来实现的,其确切机制有待于进一步的研究。(2)低剂量红景天苷可显著改善应激小鼠体重增加减缓、肾上腺指数升高、肾上腺皮质肥厚、髓质萎缩和结构层次模糊等,且能显著抑制悬尾应激所引起的睾酮水平低下并使其恢复正常,提示红景天苷可能通过改善应激所致的睾酮水平降低及维持肾上腺的正常结构和正常生理功能发挥抗应激作用。(3)建立RP-HPLC内标法测定血清中红景天苷的方法简便、快速、准确,适用于红景天苷的血药浓度测定及动力学研究。且红景天苷给药剂量在15～60 mg/kg范围内,其体内药物动力学过程属于线性药物动力学,体内消除为一级速率过程,模型拟合二室为最匹配模型。