【摘 要】
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目的:绵羊肺腺瘤病（sheep pulmonary adenomatosis,SPA）又可称为驱羊病（jaagsiekte）是一种慢性、进行性、致命的细支气管肺泡癌。它使许多国家和地区的养殖业遭受巨大的打击,使养殖户受到严重的经济损失。SPA与人类细支气管肺泡癌（BAC）存在共同的特征,包括相似的组织学外观和常见的细胞信号通路的激活。与小鼠肺相比绵羊肺与人肺更加接近,这促进了绵羊肺腺瘤作为人类肺癌
【基金项目】
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国家自然科学基金,课题名称:新疆绵羊肺腺瘤肿瘤标志物发掘及其在病理形成中的作用研究,课题编号:31960691；
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目的:绵羊肺腺瘤病（sheep pulmonary adenomatosis,SPA）又可称为驱羊病（jaagsiekte）是一种慢性、进行性、致命的细支气管肺泡癌。它使许多国家和地区的养殖业遭受巨大的打击,使养殖户受到严重的经济损失。SPA与人类细支气管肺泡癌（BAC）存在共同的特征,包括相似的组织学外观和常见的细胞信号通路的激活。与小鼠肺相比绵羊肺与人肺更加接近,这促进了绵羊肺腺瘤作为人类肺癌的模型研究。因此,本实验采用化学药品氨基甲酸乙酯和绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白（JSRV Env）对小鼠和湖羊进行致癌性试验,探究稳定建立小鼠及绵羊肺腺瘤模型的方法。方法:1、随机选取10只小鼠以及3只湖羊,应用氨基甲酸乙酯分别对小鼠以及湖羊进行药物诱导试验;10只小鼠及3只湖羊注射5%葡萄糖生理盐水。每5周采集小鼠及湖羊血液,在用药30周后处死全部试验动物,剖检取出小鼠及湖羊肺脏于4%福尔马林固定。对采集到的血液进行T细胞表面分子CD4分子、CD8分子及细胞因子IL-4、TNF-α、IFN-γ测定;剖检观察将病变肺脏组织制成切片在光学显微镜下观察;免疫组化检测肿瘤标志物CEA、NSE、TTF-1。2、制作重组真核表达质粒pc DNA3.1-env,随机抽取20只小鼠分为转染组及空白对照组,每组10只;抽取6只湖羊分为转染组和空白对照组,每组3只。用体内转染试剂气管滴注到小鼠及湖羊体内。在转染3周后采用RT-PCR的方法检测真核表达质粒在小鼠及湖羊肺部的表达情况;每5周采集小鼠及湖羊血液,在转染30周后处死全部实验动物,对采集到的血液进行CD4分子、CD8分子及细胞因子IL-4、TNF-α、IFN-γ测定;剖检观察并将病变肺脏组织制成切片在光学显微镜下观察;免疫组化法检测肿瘤标志物CEA、NSE、TTF-1。结果:1、使用氨基甲酸乙酯药物诱导结果显示:小鼠血清免疫指标与对照组相比血清中CD4分子显著降低,CD8分子显著升高,CD4/CD8显著降低;血清中淋巴因子TNF-α显著升高,肺脏组织表面可见灰白色的腺瘤结节,且镜检可见Ⅱ型肺泡上皮细胞呈乳头状增生,肺泡腔巨噬细胞浸润,肿瘤标志物CEA、TTF-1呈阳性。湖羊血清免疫指标与对照组相比没有显著变化,镜检未发现肺泡和支气管上皮细胞存在乳头状增生,肿瘤标志物TTF-1显示支气管上皮出现阳性细胞,但CEA、NSE均为阴性。2、体内转染重组真核表达质粒pc DNA3.1-env结果显示:气管滴注的小鼠,转染3周后真核表达质粒在小鼠肺脏组织表达,免疫指标检测CD4分子、CD4/CD8显著降低,CD8分子、IFN-γ及TNF-α均显著升高,肺部出现形状大小不一的灰白色结节,肺泡壁上皮细胞和细支气管上皮细胞增生,呈乳头状向肺泡腔内或细支气管腔内生长,肿瘤标志物CEA、TTF-1检测为阳性。湖羊转染3周后可在肺脏中检测到Env基因表达,淋巴细胞及细胞因子没有显著变化,病理组织学观察未发现特征性病理变化,肿瘤标志物CEA、NSE检测结果均为阴性,TTF-1检测发现上皮来源的癌细胞。结论:1、在二级致癌物氨基甲酸乙酯药物诱导试验中,氨基甲酸乙酯800mg/kg腹腔注射,每周2次,连续5周可诱导C57BL/6小鼠产生肺腺癌;在绵羊肺腺瘤囊膜蛋白体内转染试验中,应用气管滴注的方法,对C57BL/6小鼠可以产生致瘤性作用,并最终使小鼠长出肺腺瘤,进一步证实了单独表达湖羊肺腺瘤囊膜蛋白基因就足以诱导动物发生肺腺瘤。2、对湖羊进行氨基甲酸乙酯药物诱导试验以及绵羊肺腺瘤囊膜蛋白体内转染试验时,均未使湖羊产生肺腺瘤,但在肿瘤标志物TTF-1检测中,均发现了上皮来源的癌细胞。
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