背景:非酒精性脂肪肝病（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）在全球患病率较高、危害大、医药负担重,现有药物难有显著疗效,因此开发新的药物靶点将具有积极的临床意义。GPR180是一类G蛋白偶联受体,也被称为内膜厚度相关受体（Intimal thickness-related receptor,ITR）,在血管平滑肌细胞的生长中发挥作用。目前对 GPR180 的研究报道相对较少,研究的关注点除了血管重塑方面外,GPR180还可能参与肿瘤的发生发展。最近,一些全基因组关联分析（Genome wide association study,GWAS）的研究报道了 GPR180发生单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）可能与高甘油三酯血症相关。这些GWAS分析提示了 GPR180参与脂质代谢的可能性,但是GPR180在脂代谢中是否发挥生物学功能,发挥怎样的功能以及可能的作用机制、其潜在的内源性配体仍然不清楚。方法:本研究①对小鼠采用两种不同饮食模式:正常饮食和高脂饮食,每种饮食模式分为两组;一组尾静脉注射对照腺相关病毒AAV shRNA-scramble,而另一组注射AAV shRNA-GPR180。喂养12.5周,结合多项指标评估GPR180干预后对机体代谢的影响。另外在体外Hepa1-6细胞中,通过过表达和敲减GPR180验证GPR180对甘油三酯以及胆固醇合成的影响,并探索其中的分子信号通路。为了研究GPR180的配体,通过pull-down、免疫共沉淀以及生物信息学预测筛选潜在的内源性配体。结果:1.GPR180敲减对正常饮食小鼠脂代谢的影响通过GPR180表达水平检测,正常饮食小鼠AAV shRNA-GPR180处理组与对照组相比肝脏GPR180敲减效率约为50%。AAV shRNA-GPR180处理组虽未显著影响脂代谢,如小鼠体重、血浆及肝脏中脂质含量等无明显变化;但是在一定程度上能够增强小鼠能量代谢、胰岛素敏感性以及降低体内脂肪含量。2.GPR180敲减对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂代谢的影响高脂饮食小鼠AAV shRNA-GPR180处理组与对照组相比肝脏GPR180敲减效率约为45%,且AAV shRNA-GPR180处理组小鼠肝脏脂肪变性得到明显改善。GPR180敲减小鼠显示体重明显减轻、胰岛素敏感性增强、能量代谢率升高、体内脂肪含量减少、血浆和肝脏脂质含量降低、皮下与附睾脂肪重量减轻、肝脏脂滴减少以及肝脏主要调节脂质合成的转录因子Srebp1和Srebp2表达下调。3.GPR180分子机制研究在Hepa1-6细胞中过表达和敲减GPR180,结果显示GPR180过表达时甘油三酯和胆固醇合成增多,转录因子Srebp1和Srebp2以及其靶基因皆表达上调;而敲减GPR180,甘油三酯和胆固醇合成减少,转录因子Srebp1和Srebp2以及其靶基因表达下调。293T细胞转染pcDNA-GPR180、pGL3-CREB等用于双荧光素酶报告基因的质粒,通过检测荧光信号发现GPR180组跟对照组相比其信号明显减弱。另外通过检测Hepa1-6恢复血清后不同时间点PKA底物磷酸化水平,发现GPR180过表达组与对照组相比在30 min时PKA底物磷酸化水平开始降低,在6h尤为明显。这些结果显示GPR180为Gi型G蛋白偶联受体,同时抑制PKA的活性呈现时间依赖性。4.GPR180的潜在配体研究通过pull-down、免疫共沉淀以及生物信息学预测等方法,筛选出GPR180潜在配体为 Asprosin 和 Clusterin。结论:GPR180敲减改善高脂饮食诱导肥胖小鼠的肝脏脂肪变性,GPR180通过上调转录因子Srebp1和Srebp2及其靶基因的表达促进甘油三酯和胆固醇的合成;GPR180可能通过Gi蛋白抑制cAMP-PKA信号介导这一调控机制。Asprosin和Clusterin是GPR180的潜在配体。