应用"Nest PCR"技术,从斑马鱼基因组DNA中扩增出15kb的DNA片段,这个PCR片段覆盖了整个生长激素基因.序列分析表明斑马鱼GH基因长约5.5kb,由5个外显子和4个内含子组成.结构分析比较表明,斑马鱼GH基因在大小上与其他鲤科鱼类的GH基因存在较大差异,是迄今为止最大的GH基因.drGH基因的编码序列与其它鲤科鱼类同源性很高,氨基酸编码序列同源性达85％.TATA框在转录起始位点28个核苷酸处,并在启动子5-侧翼序列中发现5个GHF1/Pit-1应答序列,其中位于-68/-76,-396/-404的两个应答元件呈反向排列.通过GFP报告基因系统,对GH基因的启动子表达活性及时空表达模式进行研究.构建pGN886和pGN242表达载体,线性化后注射入斑马鱼受精卵中,通过报告基因GFP的指示,观察其时空表达模式.结果表明,GH基因启动子5-侧翼300bp的调控序列足以起始基因的表达,并表现出特异的时空分布.基于已有的斑马鱼β-actin基因数据,PCR分离并克隆了β-actin基因启动子及5侧翼序列约1.3kb DNA片段.通过GFP报告基因系统,对β-actin基因的启动子表达活性进行研究,结果表明,所克隆的β-actin基因启动子能够高效的启动报告基因在CHO细胞中的表达.构建基因打靶载体pGHT1.7k、pGHT2.8k,采用双荧光筛选盒--用GFP基因作正选择标记基因,用RFP基因作负选择标记基因,用斑马鱼GH基因组片段作同源序列,构建了鱼类GH基因同源重组载体.将此载体注射入斑马鱼受精卵中后,证明上述正、负选择标记基因在胚胎中能够有效表达,并提供阳性打靶胚胎的筛选标记.在斑马鱼胚胎中进行转植基因定点整合研究,采用双荧光筛选的方法,在转基因的肌肉效应期,部分胚胎中检测到绿色荧光细胞团,绿色荧光细胞嵌合体的出现频率约为1.89%(167/8820).该项研究首次在模式生物中进行基因打靶的研究,在模式生物斑马鱼中建立了基因修饰技术平台,并验证了它的可行性.采用荧光筛选方法,进行鱼类基因打靶研究,将对斑马鱼中的功能基因组学研究有重大的意义.